イノシトール6リン酸がヒト好塩基球に及ぼす影響

六磷酸肌醇对人嗜碱性粒细胞的影响

• 批准号: 14760215
• 负责人: 原 崇
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760215/
• 关键词: イノシトール6リン酸; KU812F; 好塩基球; ヒスタミン; 脱顆粒; ヒスチジン脱炭酸酵素; 細胞内活性酸素種レベル; ヒスタミン放出; プロテインキナーゼC; ホスファチジルイノシトール3キナーゼ; イノシトール6リン酸; KU812F; 好塩基球; ヒスタミン; 脱顆粒; ヒスチジン脱炭酸酵素; 細胞内活性酸素種レベル; ヒスタミン放出; プロテインキナーゼC; ホスファチジルイノシトール3キナーゼ

昨年度の研究成果から、イノシトール6リン酸(IP6)はヒト好塩基球様KU812F細胞の脱顆粒を促し、さらに、ヒスタミン合成を担う酵素であるL-ヒスチジン脱炭酸酵素(HDC)の活性とそのmRNA発現量を増大させることが明らかとなった。KU812F細胞においてIP6によるHDC活性増大は転写レベルで誘導されており、ヒト末梢血から分離した好塩基球画分の細胞についても同様の結果が得られた。Fura 2-AMを用いたフローサイトメーター解析の結果、IP6によるHDC活性およびmRNA量増大は細胞内Caレベル上昇を伴うことが確認された。このHDC活性およびmRNA量増大は、Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII阻害剤であるKN-93により抑制されたことから、好塩基球のHDC発現にはCaシグナリングが重要であることが示された。また、IP6に応答して細胞内活性酸素種レベルの増大が認められ、ここで生成した活性酸素種は、生体防御や何らかの情報伝達に関わる役割を担っているのではないかと推察された。一方、KU812F細胞にはヒスタミンだけでなく、セロトニン、ドーパミンなどの生理活性物質が電気化学検出器を用いて検出された。しかし、10%ウシ胎児血清添加RPMI-1640培地中で1mMのIP6による7日間の培養処理では、これらの生理活性物質の細胞内蓄積量に顕著な変化を及ぼさなかった。本年度は、表面プラズモン共鳴現象を応用し、イノシトール6リン酸の受容体の単離、同定を試みた。金膜表面にカルボキシメチルデキストランをコートしたセンサチップを選択し、これにIP6を固定化した。このプレート上のIP6に結合するKU812F細胞の細胞膜タンパク質の単離を試みたが、現在のところ、特定のタンパク質の回収には至っていない。今後、実験条件を改良し、IP6結合タンパク質の同定を継続して進めていく。

去年的研究结果表明，肌醇6磷酸盐（IP6）促进了人类粒细胞样KU812F细胞的脱粒化，并且还增加了L-齐二氨酸脱羧酶（HDC）的活性，该酶是一种负责组胺合成及其mRNA表达水平的酶。在KU812F细胞中，在转录水平上诱导了IP6的HDC活性增加，并获得了从人外周血分离的嗜碱性分数中的细胞的相似结果。使用Fura 2-AM进行流式细胞仪分析证实，IP6的HDC活性和mRNA水平的增加伴随着细胞内Ca水平的升高。 KN-93抑制了HDC活性和mRNA水平的增加，KN-93是Ca^<2+>/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II抑制剂，表明CA信号对于嗜碱性粒细胞中的HDC表达很重要。此外，对IP6的响应观察到了细胞内活性氧水平的增加，并且据推测，此处产生的活性氧在生物防御和某种信息传播中起作用。另一方面，不仅组胺，而且使用电化学探测器检测到生理活性物质，例如5-羟色胺和多巴胺。然而，在补充10％胎牛血清的RPMI-1640培养基中，用1 mM IP6进行培养的7天治疗并没有在这些生理活性物质的细胞内积累中产生任何显着变化。今年，我们试图使用表面等离子体共振现象分离并鉴定6磷酸肌醇的受体。选择了带有金膜表面上涂有羧基二甲氧夹的传感器芯片，并将IP6固定在此上。我们试图将与该板上IP6结合的KU812F细胞分离出细胞膜蛋白，但尚未恢复任何特定的蛋白质。将来，我们将继续改善实验条件，并继续识别IP6结合蛋白。