石油分解菌の選択的活性化を利用した新規バイオリメディエーション法の開発

开发利用选择性激活石油降解细菌的新生物修复方法

基本信息

批准号：
14780449
负责人：
岩淵範之
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

石油汚染は、一千種以上の炭化水素化合物の複合汚染であり、汚染域にはアルカンのような短期間で消失する成分から多環芳香族炭化水素(PAHs)のように長期間残留する成分まで含まれている。一般に海洋に流出した石油は、様々な過程により成分変化が起こり、PAHsなどを中心とする難分解性画分が長期間残留することから、この残留する画分を分解・除去するための浄化技術の開発が必要となる。昨年度までの研究において、高濃度石油耐性菌であるRhodococcus rhodochrous S-2株の細胞外多糖(S-2 EPS)の模擬石油汚染海洋環境への投与が、海水の微生物コンソーシアの中で特定の石油分解菌(Cycloclasticus属細菌)を選択的に活性化し、残留画分の主成分となっている多環芳香族炭化水素(PAH)の分解が促進されることを見出した。本年度は、Cycloclasticus属細菌の菌学的特徴を明らかにするために、同細菌の単離、培養を試みた。実際の海水からCycloclasticusの環境単離株2株を集積培養により得た。同細菌は寒天培地上で生育させることが困難であったため、その培養法を検討した。その結果、ビフェニル(bph)を炭素源としたMA培地にスポット法により植菌し、bph由来のカテコールが開環するときに生産される黄色の色素を成育の指標として、Most Probable Numberで解析するSpotting Inoculation and MPN analysis(SI-MPN)法を開発した。細胞懸濁液(ca.10^8cells/ml)の10倍希釈系列を作製し、total direct count(TDC)とSP-MPNとを比較検討したところ、相関係数がr^2=0.99と高かったことから、本手法がCycloclasticusの生菌数の測定に有効であると考えられた。

石油污染是1000多种碳氢化合物的复合污染，污染区既有烷烃等短时间内消失的成分，也有多环芳烃（PAHs）等长期残留的成分。包括最多）。一般来说，泄漏到海洋中的石油经过各种过程会发生成分变化，并且难以分解的馏分（主要是PAH）会长期残留，因此需要开发净化技术来分解和去除这些残留馏分。必需的。截至去年进行的研究中，将来自红红球菌菌株 S-2（一种高度耐油细菌）的胞外多糖（S-2 EPS）施用于模拟的石油污染海洋环境中，结果表明，海水微生物群落我们发现该方法选择性地激活降解细菌（环碎菌细菌）并促进残留馏分的主要成分多环芳烃（PAH）的分解。今年，我们尝试分离培养环碎屑菌，以阐明其真菌学特征。通过富集培养从实际海水中获得了两个环境分离的环碎菌菌株。由于该细菌很难在琼脂培养基上培养，因此我们研究了培养方法。结果，我们使用点法接种以联苯（BPH）作为碳源的MA培养基，并使用BPH衍生的儿茶酚打开时产生的黄色素作为生长指标，使用最可能的点接种数进行分析。并开发了MPN分析（SI-MPN）方法。当我们制备10倍稀释系列的细胞悬液（约10^8个细胞/ml）并比较总直接计数（TDC）和SP-MPN时，相关系数高达r^2=0.99，因此，该方法被认为对于测量活环碎屑菌的数量是有效的。