加齢変化にともなう記憶障害の歩行運動による予防メカニズムについての研究

步行运动预防衰老变化记忆障碍的机制研究

基本信息

批准号：
14780015
负责人：
石田佳幸
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、歩行運動負荷によって加齢にともなう海馬神経細胞の変性を予防するメカニズムを明らかにすることにある。歩行運動負荷による海馬での長期増強を詳しく調べるためのIn vitroの電気生理的解析システムを構築した。老齢ラットでパッチクランプを行う予備実験として、成熟ラットでの海馬のスライスを作製して単一シナプス後細胞のホールセルパッチクランプシステムを準備した。ラット(6-8月齢)にNembutal(50mg/kg)で麻酔処置して4℃に冷やしたmodified Ringer液を心臓から灌流した後、断頭した。ただちに脳を取り出し不必要な部位をトリミングしてシャーベット状のcutting solutionで冷やした後、マイクロスライサーで海馬スライス(200μm)を作製した。作製した海馬スライスを31℃に維持した記録チャンバーに固定した。設備備品であるIR-DICパッチクランプシステムを用いて、submerge法によるホールセルパッチクランプを行った。以上から海馬での単一シナプス後細胞の自発性シナプス電流(sEPSC)または自発性微小シナプス電流(mEPSC)の振幅と頻度を測定して長期増強を解析できるシステムを構築した。今後は、本研究の課題である青斑核を介した海馬神経細胞の変性予防のメカニズムを検討する。老齢ラットの脳室にノルアドレナリン選択的神経毒DSP-4 saporinを投与して青斑核を破壊した後、歩行運動負荷した海馬神経細胞の特性を長期増強の測定を中心として形態学的、分子生物学的な手法を用いて調べる予定である。

这项研究的目的是澄清防止随着行走运动负荷而与年龄相关的海马神经元变性的机制。我们已经构建了一个体外电生理分析系统，以密切检查由于步态运动负荷而导致海马的长期增强。作为在老年大鼠中进行贴片夹的初步实验，在成熟的大鼠中制备海马切片，以制备单个突触后细胞的全细胞贴片夹系统。用nembutal（50 mg/kg）麻醉大鼠（6-8个月大），并用心脏改良的铃声液冷却至4°C，然后斩首。立即除去大脑，并使用类似冰糕的切割溶液修剪并冷却不必要的部分，然后使用微固定器制备海马切片（200μm）。将准备好的海马切片固定在31°C的记录室中。使用IR-DIC贴片夹系统进行全细胞贴剂夹具，该系统是设备固定装置。从上面，我们构建了一个可以通过测量自发性突触电流（SEPSC）或自发的微突触电流（MEPSC）在海马室中单一突触后细胞中自发性突触电流（SEPSC）或自发的微突触电流（MEPSC）来分析长期增强的系统。将来，我们将研究通过本研究的主题来防止海马神经元变性的机制。在甲肾上腺素能神经毒素DSP-4糖蛋白被施用到陈年大鼠的心室以破坏院的院后，将使用形态学和分子生物学技术来研究进行步行步行运动的海马神经元的特征，重点是测量长期的增强。