GGAによるストレスタンパク誘導がATP感受性Kチャネルに及ぼす影響

GGA 诱导应激蛋白对 ATP 敏感 K 通道的影响

• 批准号: 14770775
• 负责人: 野崎 淳平
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770775/
• 关键词: Garanylgeranylacetone; 心筋保護作用; 虚血再灌流障害; ストレスタンパク; セルベックス; K_<ATP>チャネル; パッチクランプ法; HSP; 先行虚血; 心筋; 心筋細胞膜; GGA

近年,GGAが心筋保護作用を有することが明らかにされた。先行虚血は心筋保護作用を持つが,その機序にK_<ATP>チャネルが推定されている。平成15年度は2,4dinitrophenol (DNP,ミトコンドリアでのATP合成阻害剤)で作成した心筋虚血モデルにおいてGGAにより誘導されたストレスタンパクがK_<ATP>チャネル活性に及ぼす影響をK_<ATP>チャネル(心筋型:Kir6.2/SUR2A)を細胞膜に発現させた培養Cos7細胞およびラット大動脈培養平滑筋細胞(A-10 cell)を用いてパッチクランプ法(cell-attached法)により検討した。方法 GGA 1μM(GGA群)または溶媒(溶媒群)を各細胞に2時間インキュベート後パッチクランプを行った。また時間コントロールとしてなにも投与しない群(control群)を加えた。チャネルのコンダクタンスおよびpinacidilとglibenclamideに対する感受性からK_<ATP>チャネル電流を確認し,baselineの開口率を5分間測定した。その後DNP10μMを5分間灌流し心筋虚血時のK_<ATP>チャネルの開口率を測定した。DNPをwash out後,K_<ATP>チャネル開口薬pinacidil 100μMを投与しK_<ATP>チャネルを完全に開口させた。このときの開口率を100%とし,baselineおよびDNP灌流時の開口率を標準化してそれぞれのrelative channel activitiesを算出した。これらから,baselineを0としたときのDNP灌流時のrelative channel activitiesを評価した。データは平均値±標準偏差で示した。統計はANOVAおよびsheffe's testで行い,p<0.05を有意差ありとした。結果 (1)培養Cos7細胞 baselineを0としたときの心筋虚血時のrelative channel activitiesは,control群(n=11)の21.5±3.5 %に対して,溶媒群(n=5)は20.1±4.4%,GGA群(n=7)は24.4±5.9 %で,3群に有意差はなかった。(2)培養平滑筋細胞 同様にbaselineを0としたときの心筋虚血時のrelative channel activitiesは,control群(n=8)の49.5±12.3 %に対して,溶媒群(n=7)は50.3±6.4%GGA群(n=7)は52.6±16.4 %で,3群に有意差はなかった。結論 DNPで作成した心筋虚血モデルにおいてGGAによるストレスタンパク誘導は心筋および平滑筋細胞膜K_<ATP>チャネル活性に影響を及ぼさないことがわかった。この結果からGGAにより誘導されたストレスタンパクによる心筋保護作用は心筋細胞膜K_<ATP>チャネルの活性化を介さないことが示唆された。

最近，已经揭示了GGA具有心肌保护作用。尽管缺血之前具有心肌保护作用，但K_ <ATP>通道的机理估计。在2003年，在使用2,4的二硝基苯酚（DNP，线粒体中ATP合成的DNP，ATP抑制剂）创建的心肌缺血模型中，GGA诱导的应激蛋白对K_ <ATP>通道活性的影响通过贴片夹夹方法（CellAttached方法）进行了培养的COS7细胞（Cellatchached方法）（使用培养的COS7培养的细胞（A），研究了ATP的ATP合成（DNP）的影响（dnp，线粒体中的ATP抑制剂）。 （心肌类型：Kir6.2/sur2a）在细胞膜上表达。方法：在将1μMGGA（GGA组）或溶剂（溶剂组）孵育2小时后，进行斑块夹。此外，一个没有添加任何内容的组作为时间对照组。根据通道电导和对Pinacidil和Glibenclamide的敏感性确认K_ <ATP>通道电流，并测量了基线孔径比5分钟。之后，将10μMDNP灌注5分钟，以测量心肌缺血期间K_ <ATP>通道的开口比。清洗DNP后，对100μm的K_ <ATP>通道打开代理Pinacidil施用以完全打开K_ <ATP>通道。目前的光圈比设置为100％，基线和DNP灌注时的光圈比进行了标准化以计算每个的相对通道活性。从这些情况下，将基线设置为0时评估了DNP灌注过程中的相对通道活性。数据显示为平均值±标准偏差。使用ANOVA和Sheffe的测试进行统计数据，P <0.05是一个显着差异。结果（1）将基线设置为0时培养的COS7细胞，在对照组（n = 11）中，心肌缺血期间的相对通道活性为21.5±3.5％，而溶剂组（n = 5）为20.1±4.4％，GGA组（n = 7）（n = 7）为24.4.4±5.9％，而在这三组之间没有显着差异。 （2）同样，当将基线设置为0时，对照组（n = 8）的心肌缺血期间的相对通道活性为49.5±12.3％，而GGA组的车辆组（n = 7）为50.3±6.4％（n = 7），这三组没有显着差异。结论用DNP创建的心肌缺血模型中GGA诱导应力蛋白，对心肌和平滑肌细胞膜K_ <ATP>通道活性没有影响。这些结果表明，GGA诱导的应激蛋白的心肌保护作用不会介导心肌细胞膜K_ <ATP>通道的激活。