トランスジェニックマウスを用いた胃粘膜は通鑑のクローナリテイの解析

转基因小鼠胃粘膜克隆性分析

• 批准号: 13770688
• 负责人: 野村 幸世
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770688/
• 关键词: 胃癌; クローナリティ; 胃発癌; X染色体不活性化; X染色体; 胃粘膜; 胃; 腫瘍性

Hcmizygote F1マウスは50頭しかそろえられず、50頭にメチルニトロソウレアを投与した。そのうち、投与開始より1年間生存したものは36頭であった。メチルニトロソウレア投与により、その投与濃度にかかわらず、ほぼ100%胃癌の形成が認められた。また、100%に胃以外の臓器にも癌が認められた。担癌臓器はリンパ節、肝臓、肺、脾臓であった。肺以外は胃癌の転移と考えられた。採取した胃はまだすべての解析が終わっていない。すでに解析が終了した5頭においては、すべて組織学的にも担癌であった。5頭のうち2頭は癌が多発していた。これを含む9病変のうち4病変はポリクローナルであった。しかし、これが衝突癌である可能性は否定できるものではない。以上のすでに解析済みのものは、凍結切片にて施行したが、凍結切片では、HE染色像もあまりクリアでない。クローナリテイの解析に使用しているX-gal法そのものは凍結切片でないと不可能であるが、β-galactosidascの免疫染色であれば、パラフィン切片でも可能である可能性があり、今後、これによる解析を検討中である。現在のところ、パラフィン切片に対するβ-galactosidascの免疫染色自体の条件が確率できていない。また、ポリクローナルに見える腫瘍において、真に上皮細胞がポリクローナルであることを証明するために、連続切片におけるケラチンの免疫染色を検討中である。また、発癌剤投与により、X染色体不活化そのものに影響が出た可能性も否定できないため、現在、Homozygousのマウスを作成中であるが、これは出生率が低いため、今だにいる。これが得られたあかつきには、再び、これらにMNUを投与する予定である。

只有 50 只 Hcmizygote F1 小鼠，其中 50 只接受了甲基亚硝基脲治疗。其中，36 只动物从治疗开始后存活了一年。施用甲基亚硝基脲后，无论施用浓度如何，都观察到几乎100%形成胃癌。此外，100%的人在胃以外的器官中患有癌症。致癌器官是淋巴结、肝脏、肺和脾。人们认为胃癌已经转移到肺部以外的其他部位。对胃样本的所有分析尚未完成。在已经完成分析的五只动物中，所有动物都在组织学上被发现患有癌症。五只狗中的两只患有多种癌症。包括这一个在内的九个病变中有四个是多克隆的。然而，不能否认这是碰撞癌的可能性。上述之前分析的病例都是使用冰冻切片进行的，但是冰冻切片的HE染色图像不是很清晰。虽然用于克隆性分析的 X-gal 方法只能使用冷冻切片，但可以使用石蜡切片进行 β-半乳糖苷的免疫染色，我们计划在未来使用该技术进行分析。目前，石蜡切片上β-半乳糖苷免疫染色的条件尚未建立。此外，为了证明肿瘤中看似多克隆的上皮细胞确实是多克隆的，我们目前正在研究连续切片中角蛋白的免疫染色。另外，我们不能否认服用致癌药物可能影响X染色体失活的可能性，所以我们目前正在创造纯合子小鼠，由于出生率低，仍然可以获得。一旦获得此信息，我们计划再次对这些动物施用 MNU。