腫瘍抑制遺伝子WT1のエピジェネティック変化による発現制御機構の解明

通过抑癌基因WT1的表观遗传变化阐明表达控制机制

• 批准号: 13770069
• 负责人: 副島 英伸
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: 佐賀医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770069/
• 关键词: WT1; Wilms腫瘍; DNAメチル化; プロモーター; ゲノム刷り込み; 刷り込みドメイン; OBPH1; Obph1; 腫瘍抑制遺伝子; Bisulfite-Sequencing法; ルシフェラーゼレポーターアッセイ; WT1; Wilms腫瘍; DNAメチル化; プロモーター; ゲノム刷り込み; 刷り込みドメイン; OBPH1; Obph1; 腫瘍抑制遺伝子; Bisulfite-Sequencing法; ルシフェラーゼレポーターアッセイ

WT1はウィルムス腫瘍(WT)の原因である癌抑制遺伝子であるが、その変異は約10%しか認められない。DNAメチル化により各種癌関連遺伝子が不活化されることから、WT1についても同様の機序が考えられる。WT22例について、WT1変異、11p13LOH、WT1発現定量、プロモーターメチル化解析を行った。10例にWT1発現低下を認め、1例が高メチル化を示した。この1例はLOHも認めたため、メチル化とLOHによるWT1のtwo hitが、発癌に関与していると考えられた。次に、レポーター遺伝子解析により、WT1プロモーターのメチル化が遺伝子発現を著しく抑制することが示された。これは、頻度は低いが、メチル化がWT1発現低下を起こすエピジェネティックな原因の一つであることを示唆する。一方、WT1変異とβ-カテニン変異は高頻度に合併することが報告されている。WT1発現低下例中にβ-カテニン変異は認められず、変異を認めた1例ではWT1発現は低下していなかった。これよりβ-カテニン変異とWT1発現量に関連はないと考えられた。WT1遺伝子座の近くには、WTに関連するゲノム刷り込みドメインが存在する。この刷り込みドメインはH19からIPL/IPlまでと考えられているが、IPL/IPl側の境界は決定されていない。我々は、従来の境界を越えた領域に新規刷り込み遺伝子OBPH1/Obph1を同定した。これによりヒト・マウスの刷り込みドメインは従来の境界を越えて伸長することがわかった。OBPH1/Obph1は、ヒト・マウス共に胎盤で母性アレル優勢発現を示したが、5'CpG島は両アレルとも低メチル化状態であった。本遺伝子の刷り込み状態は、DNAメチル化と関連しなかったが、ドメインレベルでの刷り込み調節機構により制御されている可能性が考えられる。

WT1是导致Wilms肿瘤（WT）的肿瘤抑制基因，但仅观察到其突变的10％。由于各种与癌症相关的基因被DNA甲基化灭活，因此考虑了类似的WT1机制。对WT22病例进行WT1突变，11P13LOH，WT1表达定量和启动子甲基化分析。十例病例显示WT1表达降低，一例显示过度甲基化。由于在这种情况下也观察到LOH，因此认为甲基化和两次由于LOH引起的WT1的命中被认为与致癌作用有关。接下来，报告基因分析表明，WT1启动子的甲基化显着抑制了基因表达。这表明甲基化是WT1表达降低的表观遗传原因之一，尽管很少。另一方面，据报道WT1突变和β-catenin突变经常相关。在降低WT1表达并且在观察到突变的一种情况下，未观察到WT1表达降低并且WT1表达不会降低。这表明β-catenin突变与WT1表达水平之间没有关联。在WT1基因座附近是与WT相关的基因组印迹域。人们认为这个烙印域范围从H19到IPL/IPL，但是尚未确定IPL/IPL侧的边界。我们在传统边界以外的地区确定了一种新颖的印迹基因OBPH1/obph1。这表明人小鼠的烙印域延伸了传统的边界。 Obph1/obph1在人和小鼠的胎盘中均表现出主要的母体等位基因表达，而两个5'CPG岛都处于低甲基化状态。尽管该基因的印记状态与DNA甲基化无关，但它很可能受到在域水平上烙印调节的机制。