小腸における核内レセプターのリガンドシグナル伝達機序と遺伝子発現制御に関する研究

小肠核受体配体信号转导机制及基因表达调控研究

基本信息

批准号：
13770034
负责人：
駿河和仁
金额：
$ 1.86万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度の結果より、不飽和脂肪酸、オキシステロールおよび胆汁酸をそれぞれリガンドとする核内レセプターPPAR、LXRおよびFXRはいずれも小腸のリガンド吸収部位と対応した発現を示しており、更にこれらのリガンドを結合する細胞内脂質結合タンパク質(それぞれFABPs、OSBPおよびIBABP)の小腸における発現性とも良く対応していた。この結果から、上記の各脂質結合タンパク質は、共通のリガンド親和性をもつ核内レセプターに対してリガンドを伝達するうえで重要な役割を果たしている可能性が示唆された。本年度はヒト小腸様培養細胞C2BBe1に上記の脂質結合タンパク質の発現ベクターをトランスフェクトし、核内レセプターの転写活性化に対する影響を調べた。各脂質結合タンパク質発現ベクターをコトランスフェクトしていないC2BBe1細胞をアラキドン酸(AA)、22(R)オキシステロール(22HC)およびケノデオキシコール酸(CDCA)で処理をしたところ、それぞれPPAR(α及びδ)、LXRαおよびFXRを介した転写活性化が見られた。さらにPPARαを介したAAによる転写の活性化は、L-FABPおよびI-FABP発現ベクターのいずれの発現下でも増強した。一方、PPARδに対してはその作用は弱かった。LXRαを介した22HCによる転写の活性化は、OSBP発現ベクターの共発現下で更に増強した。FXRを介したCDCAによる転写の活性化は、I-BABP発現ベクターの共発現下で増強した。以上の結果より、小腸おけるPPARα、LXRαおよびFXRの活性化にはそれぞれ、FABPs、OSBPおよびI-BABPがリガンド輸送において重要な役割を担っているものと考えられた。現在、さらにC2BBe1細胞内での脂質結合タンパク質の発現分布とリガンド負荷によるその変動についてGFPとの融合タンパク発現ベクターを用い解析中である。

去年的结果表明，配体分别为不饱和脂肪酸、氧甾醇和胆汁酸的核受体PPAR、LXR和FXR的表达与小肠中的配体吸收位点相对应。与小肠中细胞内脂质结合蛋白（分别为 FABP、OSBP 和 IBABP）的表达密切相关。这些结果表明，上述每种脂质结合蛋白可能在将配体传递至具有共同配体亲和力的核受体方面发挥重要作用。今年，我们用上述脂质结合蛋白的表达载体转染人小肠样培养细胞C2BBe1，并研究其对核受体转录激活的影响。当未与每种脂质结合蛋白表达载体共转染的C2BBe1细胞用花生四烯酸(AA)、22(R)氧甾醇(22HC)和鹅去氧胆酸(CDCA)处理时，PPAR(α和δ)、LXRα和FXR观察到介导的转录激活。此外，在 L-FABP 和 I-FABP 表达载体表达下，AA 介导的 PPARα 转录激活得到增强。另一方面，其对PPARδ的作用较弱。在 OSBP 表达载体的共表达下，22HC 的 LXRα 介导的转录激活进一步增强。在 I-BABP 表达载体的共表达下，CDCA 的 FXR 介导的转录激活得到增强。从以上结果可以看出，FABP、OSBP和I-BABP分别在小肠中PPARα、LXRα和FXR激活的配体转运中发挥重要作用。目前，我们正在使用 GFP 融合蛋白表达载体进一步分析 C2BBe1 细胞中脂质结合蛋白的表达分布及其由于配体加载而产生的变化。