ニホンナシにおける新規S遺伝子の発掘と遺伝子型同定システムの開発

日本梨新S基因的发现及基因分型系统的开发

基本信息

批准号：
13760005
负责人：
高崎剛志
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760005/
关键词：
自家不和合性ニホンナシ S遺伝子型 S-RNase PCR-RFLP

项目摘要

ニホンナシでは交配により7つのニホンナシの雌しべ側S遺伝子産物としてS-RNaseが同定されている.S-RNaseにはS遺伝子間でアミノ酸配列を異にする1つの超可変領域(HV領域)が存在し,花粉と雌しべの自他認識に関与しているとされる.HV領域とHV領域に挿入されたイントロンの塩基配列をもとにS_1-S_7遺伝子を識別できるPCR-RFLPシステムを用い,主要品種遺伝子型の推定を進めた.前年度までに'新興'と'新星'にS_1-S_8-RNaseとは異なるS_9-RNase cDNA断片をクローニングし,それらの遺伝子型がS_4S_9であること示している.本年度はS_9-RNase cDNAの全塩基配列を決定するため、'新興'と'新星'の花柱からmRNAを抽出し,5'-RACEによりS_9-RNase cDNAの5'末端の塩基配列を決定した.S_1-S_9-RNaseの塩基配列に基づき新たにリバースプライマーをデザインし,ゲノムDNAからS_9-RNase断片を増幅し,塩基配列を決定した.S_1-S_9-RNaseのS_9-RNaseのHV領域とイントロンを配列も基づき,S_9-RNaseを特異的に切断する制限酵素BstBIとS_2-RNaseを特異的に切断する制限酵素AflIIを選択した.'FTQQYQ'と'anti-(I/T) IWPNV'プライマーを用いたPCRによりゲノムDNAから増幅したS_1-S_9-RNase断片を9種類のS遺伝子特異的な制限酵素(Sfc I, Afl II, Ppu MI, Nde I, Alw NI, Hinc II, Acc II, Nru I, Bst BI)で切断することにより,S1-S9の対立遺伝子を有するニホンナシ品種のS遺伝子型を同定できるPCR-RFLP(S1-S9)システムを開発することができた.

在日本梨中，S-RNase 已被鉴定为通过杂交育种的 7 个日本梨的雌蕊侧 S 基因产物。S-RNase 具有 1 个 S 基因之间氨基酸序列不同的高变区（HV 区）。据说H参与花粉和雌蕊的自我他人识别。利用可根据V区和HV区插入的内含子碱基序列识别S_1-S_7基因的PCR-RFLP系统，我们对主要品种的S_9-RNase与S_1-S_8-RNase的基因型进行了估计。新星'克隆了cDNA片段，其基因型为S_4S_9。今年，为了确定S_9-RNase cDNA的完整碱基序列，我们从S_9的'Shinko'和'-RACE'中提取了mRNA。 -RNA酶确定cDNA 5'端的核苷酸序列。根据S_1-S_9-RNase的核苷酸序列，设计新的反向引物，从基因组DNA中扩增出S_9-RNase片段，并确定核苷酸序列。 S_1-S_9-RNase根据S_9-RNase的HV区和内含子的序列，我们选择了特异性切割S_9-RNase的限制性内切酶BstBI和特异性切割“FTQQYQ”和“anti-(”的限制性内切酶AflII。它）使用 IWPNV' 引物通过 PCR 从基因组 DNA 扩增出的 S_1-S_9-RNase 片段用九种 S 基因特异性限制酶（Sfc I、Afl II、Ppu MI、Nde I、Alw NI、Hinc II、Acc II、 Nru I，Bst通过使用 BI 切割，我们能够开发出 PCR-RFLP (S1-S9) 系统，该系统可以识别具有 S1-S9 等位基因的日本梨品种的 S 基因型。