新しい制がん剤耐性遺伝子群の解析と克服法の確立

新抗癌耐药基因分析及克服方法的建立

基本信息

批准号：
02151053
负责人：
桑野信彦
金额：
$ 10.43万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、制がん剤耐性獲得に関与する機構を分子レベルで解析し腫瘍耐性のマ-カ-としての有用性を検索するとともにその耐性因子を標的にした耐性克服法を考案することを進めた。その結果、1.多剤耐性MDRー1遺伝子及びその産物gp170に関して(1)腎副腎腸などでの発現を制御するエンハンサ-の単離及び副腎のgp170が薬剤結合部位の存在を明らかにした。(2)ヒト血漿中にgp170の生理的輸送蛋白の存在と部分精製を行った。(3)MDRー1遺伝子の発現が砒素処理で上昇し熱ショック蛋白の関与が示唆され、又同プロモ-タ発現は数多くの制がん剤によって上昇する機構を提示した。(4)多剤耐性の獲得時にgp170以外に85kDa蛋白をはじめとした幾つかの蛋白因子及び相当する遺伝子群の単離を進めた。(5)gp170を標的にした克服剤としてジハイドロピリジン系の異なる構造式を示す薬剤の中から培養系ならびに担癌動物実験系で強力な克服作用を示す物質を検出した。(6)ヒト急性白血病細胞を株化し多剤耐性を示す細胞株を分離し、親株耐性株ともヌ-ドマウスへ可移植性の系を樹立した。さらにMDRー1遺伝子が白血病、乳癌、Tー細胞白血病また大腸癌などで上昇している症例がみられ化学療法後に発現頻度が増加した。2.非多剤耐性に関して(1)DNAトポイソメラ-ゼI及びIIの量また質的変化がエトポシドやカンプトテシンに対する感受性を左右させていた。(2)カンプトテシン耐性のトポイソメラ-ゼIに効果を示す薬剤の探索を進めた。(3)5ーフルオロウラシルの殺細胞作用の速度論的解析から5FUR及び5FUdRの両型がその効果発現に関与していることを提示した。ヒト胃癌、結腸癌においてFUR経路が主として機能しており自然耐性の獲得においても大切であることを示唆した。(4)メタロチオネイン遺伝子はシスプラチン耐性卵巣癌で発現が増加しているがアドリアマイシン耐性肺癌では低下していた。(5)シスプラチン耐性にグルタチオンーSートランスフェラ-ゼの上昇が関与した。

在这项研究中，我们将在分子水平上分析抗癌药物耐药性获得的机制，寻找它们作为肿瘤耐药性标志物的有用性，并通过针对耐药因素设计克服耐药性的方法。结果，1.关于多药耐药MDR-1基因及其产物gp170，（1）我们分离出一个控制其在肾脏、肾上腺、肠道等表达的增强子，发现肾上腺中的gp170具有药物结合位点。 (2)进行了人血浆中生理转运蛋白gp170的存在和部分纯化。 (3)砷处理使MDR-1基因表达增加，提示热休克蛋白的参与，并提出了多种抗癌药物增加MDR-1基因表达的机制。 (4)除了gp170之外，我们还分离了多种蛋白因子，包括一个85kDa的蛋白以及获得多药耐药时相应的基因组。 (5)作为针对gp170的克服剂，我们在不同结构式的二氢吡啶类药物中检测到一种在培养体系和荷瘤动物实验体系中表现出较强的克服作用的物质。 (6)建立人急性白血病细胞并分离出具有多重耐药性的细胞系，并建立可移植至裸鼠的亲本株耐药株系。此外，MDR-1基因在白血病、乳腺癌、T细胞白血病和结直肠癌中被发现升高，且化疗后其表达频率增加。 2.关于非多药耐药性 (1)DNA拓扑异构酶I和II的量和质变化影响对依托泊苷和喜树碱的敏感性。 (2)我们寻找对喜树碱耐药的拓扑异构酶I有效的药物。 (3)5-氟尿嘧啶细胞杀伤作用的动力学分析表明5FUR和5FUdR两种类型均参与其作用的表达。我们的结果表明，FUR 途径主要在人类胃癌和结肠癌中发挥作用，并且对于获得自然抵抗力也很重要。 (4)顺铂耐药的卵巢癌中金属硫蛋白基因表达升高，而阿霉素耐药的肺癌中金属硫蛋白基因表达降低。 (5)谷胱甘肽-S-转移酶升高与顺铂耐药有关。