大腸菌走化性におけるタンパク質間相互作用のダイナミクス

大肠杆菌趋化性中蛋白质-蛋白质相互作用的动力学

基本信息

批准号：
02J05478
负责人：
塩見大輔
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

多くの感覚応答系において、入力されたシグナルの増幅は必須である。大腸菌走化性においても、走化性レセプター(MCP)がシグナルタンパク質(CheA,CheWなど)と菌体の極で複合体を形成しており、この極複合体内でのMCPダイマー間の相互作用がシグナル増幅を引き起こすと考えられている。我々は、アスパラギン酸レセプターTarのペリプラズム領域に2つのシステイン残基(サブユニット界面とダイマー間)を導入し、Tarダイマー間の相互作用を調べた。我々は、架橋されたTarが推定6量体を形成することを明らかにした。これはセリンレセプターTsrの細胞質断片の結晶が6量体ユニットを形成することと一致する。また、この推定6量体が誘引物質(アスパラギン酸)の添加により減少した。しかし、アスパラギン酸の添加はTar-GFPの極局在に大きく影響しなかった。つまり、誘引物質の添加により、ダイマー間の相互作用が変化したことが分かる。このようなMCPダイマー間相互作用の変化がシグナル増幅に関与しているかもしれない。これまでに、MCPが極に局在していることは明らかになっているが、この極局在がなんらかの制御を受けているかは明らかでない。MCPはCheR,CheBによりメチル化、脱メチル化修飾を受ける。これらの酵素の極局在がMCPのメチル化に依存していることが分かった。これは、これらの標的であるMCPの局在が自身のメチル化に制御されている可能性を示唆している。Tar-GFPのメチル化レベルを変えてTar-GFPの極局在を観察したところ、確かにメチル化レベルが高いほどTar-GFPはより極へ局在した。これは、CheA,CheWがないときにより顕著に観察された。またCheA,CheWがないときに忌避物質を加えると、Tarはクラスターを形成した。このことは、Tar-GFPの極局在がわずかながらもリガンドに制御されていることを示している。また、脱メチル化型Tar-GFPとTsrを共発現させるとTar-GFPの極局在が促進された。このことは、異種レセプターダイマー間で複合体を形成し、極に局在していることを示している。 (一部投稿準備中)

在许多感觉响应系统中，输入信号放大至关重要。在可调节性方面，运行受体（MCP）与信号蛋白（CHEA，CHEW等）形成一个复合物，并形成细菌的极点，并且MCP DIMMER之间的相互作用被认为会导致信号。放大。我们已经在天冬酰胺受体焦油的周质区域中引入了两个半胱氨酸残基（在亚单位界面和调光之间），从而研究了焦油二聚体之间的相互作用。我们已经揭示了交联的焦油形成估计的6个定量体。这与以下事实相吻合：丝氨酸受体TSR的CollogeLogen片段的晶体形成六量子单元。此外，由于添加了有吸引力的物质（天冬酸），估计量减少了六个量。然而，添加天冬酸不会显着影响tar-GFP的极性位置。换句话说，可以看出，由于添加了有吸引力的物质，戴默斯之间的相互作用发生了变化。 MCP调光器之间的相互作用发生变化可能与信号扩增有关。很明显，MCP最终已被本地化，但是尚不清楚该政策受到某种控制。 MCP被Cher和Cheb甲基化并去除。事实证明，这些酶的极化取决于MCP的甲基化。这表明这些靶MCP可以通过其甲基化控制。改变TAR-GFP的甲基化水平后，观察到TAR-GFP的政策。当没有Chea时，这是显而易见的。同样，当没有Chea时添加驱虫物质时，咀嚼，焦油就形成了一个簇。这表明TAR-GFP的段落由略微配体控制。此外，通过共同发射TAR-GFP和TSR，它将其促进了TAR-GFP的政策。这表明在异质受体二聚体之间形成复合物，并且位于极端。（部分准备）