ダニ抗原感作ヘアレスマウスを用いた皮膚炎の誘導とアトピー性皮膚炎研究への応用

蜱抗原致敏无毛小鼠诱导皮炎及其在特应性皮炎研究中的应用

基本信息

批准号：
02F00253
负责人：
古江増隆
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00253/
关键词：
ダニ抗原 Th1 Th2分化樹状細胞

项目摘要

アトピー性皮膚炎はTh2に傾く免疫反応が起されると言われている。アトピー性皮膚炎の患者さんの血清中でIgE抗体が高値になることがしばしば見られる。そのうち、もっとも高頻度に検出できるのはダニ抗原に対する特異的なIgE抗体である。したがって、ダニ抗原はアトピー性皮膚炎の発症に関与している原因の一つと考えられる。一方、マウスではダニ抗原による皮膚炎のモデルは報告されなかったため、今回私は「ダニ抗原感作ヘアレスマウスを用いた皮膚炎の誘導とアトピー性皮膚炎研究への応用」という研究課題に関する研究を開始した。実験方法:ヘアレスマウス、BALB/cマウス,C57B/6マウスを用い、粗製或いは精製したDerf2ダニ抗原をAlum4 mg/mlと混ぜて二週間置きに腹腔内接種にて免疫し、免疫後2週目、4週目、6週目に血清中のIgE抗体値をELISA法で測定した。また脾臓リンパ球数をFACSにて調べた。Th1/Th2免疫反応を起すかどうかを調べるため、CD3陽性T細胞を分離し、抗原存在下で培養し、3日後培養上清中のサイトカイン(IFN-gama,IL-4)産生を測定した。皮膚炎の誘導には免疫したマウスの背部を剃毛してから、セロファンテープで軽く角層に傷づけそれから抗原液を浸みたガーゼを張り付け、隔日交換で二週間まで観察した。まだこのような方法でヘアレスマウスを用い直接皮膚から免疫することも行った。その結果、粗製或いは精製したダニ抗原で免疫したヘアレスマウス、BALB/cマウスにおいて対照群と比べいずれも血中のIgE抗体を検出できなかった。ヘアレスマウスでは直接皮膚から免疫した方法も行ったが、局所リンパ節内の細胞数と皮膚組織内の細胞浸潤が対照群と比べ有意な差は無かったC57B/6マウスにおいては粗製抗原で免疫後4週目から血清中トータルIgE抗体値が軽度の上昇が認められたが、ダニ抗原特異的なIgE抗体値は検出レベル以下だった。脾臓のリンパ球数特にCD3陽性T細胞の増加が見られた。しかし、CD3陽性T細胞が抗原存在下で培養した上清中のサイトカインを測定したところ、ダニ抗原によるTh2サイトカインIL-4の産生が認められなかった。さらに剃毛皮膚に抗原で惹起したところ、著明な皮膚炎反応が観察されなかった。以上の結果より、マウスではダニ抗原による皮膚炎の誘導ができにくいことが分かった。

据说特应性皮炎是由 Th2 型免疫反应引起的。特应性皮炎患者的血清中经常观察到高水平的 IgE 抗体。其中，最常检测到蜱抗原特异性的 IgE 抗体。因此，蜱抗原被认为是特应性皮炎发病的原因之一。另一方面，目前还没有小鼠中蜱抗原引起的皮炎模型的报道，所以这次我进行了“利用蜱抗原致敏的无毛小鼠诱导皮炎及其在特应性皮炎研究中的应用”的研究课题。 ”开始了。实验方法：每两周腹腔接种免疫粗制或纯化的Derf2蜱抗原与明矾4mg/ml混合的无毛小鼠、BALB/c小鼠和C57B/6小鼠，免疫后2周，观察IgE抗体水平。第4周和第6周采用ELISA法测定血清。另外，使用FACS检查脾淋巴细胞的数量。为了检查是否发生Th1/Th2免疫反应，分离CD3阳性T细胞，在抗原存在下培养，3天后，测量培养上清液中细胞因子(IFN-γ、IL-4)的产生。为了诱发皮炎，将免疫小鼠的背部剃毛，用玻璃纸胶带轻轻划破角质层，并应用浸有抗原溶液的纱布，观察小鼠长达两周，每隔一天发生变化。我们还利用这种方法通过皮肤直接免疫无毛小鼠。结果，与对照组相比，用粗制或纯化的蜱抗原免疫的无毛小鼠或BALB/c小鼠的血液中未检测到IgE抗体。无毛小鼠也直接通过皮肤进行免疫，但在C57B/6小鼠中，与对照组相比，局部淋巴结的细胞数量或皮肤组织的细胞浸润没有明显差异，血清总IgE略有增加。从第4周开始观察到抗体水平，但蜱抗原特异性IgE抗体水平低于检测水平。观察到脾脏中淋巴细胞数量增加，尤其是 CD3 阳性 T 细胞。然而，当我们测量在抗原存在下培养的 CD3 阳性 T 细胞上清液中的细胞因子时，我们发现蜱抗原没有产生 Th2 细胞因子 IL-4。此外，当用抗原攻击剃毛的皮肤时，没有观察到明显的皮炎反应。由以上结果发现，蜱抗原很难在小鼠体内诱发皮炎。