自己支持性ハニカムネットを用いた選択的細胞分離法の開発

使用自支撑蜂窝网选择性细胞分离方法的开发

基本信息

批准号：
13780666
负责人：
田中賢
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Poly(ε-caprolacton)(PCL)と両親媒性アクリルアミド共重合体を重量比10:1で混合したクロロホルム溶液をガラスシャーレ上に1〜20mlキャストすることで製膜した。2〜20μmの孔径を有する多孔質薄膜を、シリコーンパッキンで挟み込み、人新鮮血を濾過した。濾過前後の細胞数は血球カウンターを用いて求めた。濾過時の活性化の指標として、β-TG産生量や溶血の確認を行った。孔径が5.5〜9.8μmの多孔質薄膜を用いて人血液の濾過を行った場合、濾過血液中に白血球の存在は認められなかった。白血球は孔にトラップまたは幹に吸着していた。PCL膜表面は、血小板の粘着数・形態変化が多く、濾過血液中の血小板回収率の低下が観測された。一方、水不溶性で粘着性の高い新規血液適合性高分子:Poly(2-methoxyethyl acrylate)(PMEA)の0.1wt% MeOH溶液でコーティングしたPCL膜では、血小板の粘着がほとんど起こらないため、血小板回収率が上昇した。β-TG産生量は、PMEA未コーティング時に比べ約半分以下であった。さらに、濾過前後の血漿のUV-Visスペクトル測定の結果、Oxyhemoglobin由来のピークがPMEA未コーティング時に比べ有意に低下し溶血がほとんど生じないことが分かった。PMEAコーティング膜は、分離性能を維持したまま、染み出し・濾過速度を大きくできることも分かった。以上の結果から、孔径の均一な多孔質薄膜と血液適合性表面処理を組み合わせることで、細胞分離膜に要求される高選択分離性能と細胞や血液成分へのダメージの小さい表面が構築できることが明らかになった。この多孔質薄膜は、目的とする細胞をソフトトラップできるので、再生医療のためのインプラントデバイスとしても有用であると考えられる。

在玻璃培养皿上施放氯仿溶液，其中poly（ε-副乳酸分泌剂）（PCL）和两亲性丙烯酰胺共聚物的重量比为10：1，并施放1至20 mL。将孔径为2-20μm的多孔薄膜夹在硅胶垫之间，并过滤新鲜的人血之间。使用血细胞计数器确定过滤前后的细胞数量。作为过滤过程中激活的指标，确认了β-TG的产生量和溶血。当使用孔径为5.5-9.8μm的多孔薄膜过滤人血时，在过滤后的血液中未发现白细胞。白细胞被吸附到孔中的陷阱或树干上。 PCL膜表面的血小板数量和形态的变化很大，并且观察到过滤血液中血小板回收率降低。另一方面，在涂有0.1WT％MEOH溶液的聚（2-甲氧基乙烯酯）（PMEA）（PMEA）的PCL膜中，血小板恢复速率增加，这是一种新型的水溶剂，高度粘合剂，导致血小板恢复率高。未涂有PMEA时，产生的β-TG的量约为该量的一半。此外，过滤前后血浆的紫外线光谱表明，源自催产血红蛋白的峰显着低于未涂层PMEA，并且几乎没有发生溶血。还发现，PMEA涂料膜可以在保持分离性能的同时提高渗漏和过滤率。以上结果表明，通过将多孔薄膜结合具有均匀的孔径和血液兼容表面处理的多孔薄膜，可以创建一个表面，需要高选择性分离性能，对细胞和血液成分的损害较小。这种多孔的薄膜可以软捕获靶细胞，被认为是用于再生医学的植入式装置。