難治性細菌感染症における細菌の増殖、潜伏及び感染持続機構の解析と新規治療法の確立

分析顽固性细菌感染中的细菌生长、潜伏和感染持续机制并建立新的治疗方法

基本信息

批准号：
13226049
负责人：
橋本渉
金额：
--
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

緑膿菌は、多糖アルギン酸をバイオフィルムとして産生し、感染症を誘発する。バイオフィルム細菌感染症は、その強固な菌蓋による抗生物質不透過性のために難治性を示す。従って、難治性バイオフィルム細菌感染症の治療において、バイオフィルムの除去が有効である。本研究では、細菌由来アルギン酸分解酵素(アルギン酸リアーゼ:A1-III)をバイオフィルム除去剤として開発することにより、バイオフィルム細菌感染症の新規治療法の確立を検討している。今年度は、バイオフィルムの破壊に適した無抗原性酵素の調製とその酵素学的・免疫学的性質を解析した。N-ヒドロキシスクシニル化ポリエチレングリコールエステル(PEG)(分子量:2,000、5,000及び12,000)で、A1-IIIのリシン残基を修飾し、その諸特性を未修飾酵素と比較した。50mMリン酸カリウム緩衝液における未修飾体の活性至適pHは7.5であったが、PEG分子量に拘わらず修飾体では至適pHが酸性側にシフトした。未修飾体の活性至適温度は65℃であったが、修飾体では至適温度は低温側にシフトした。PEG分子量に拘わらず、修飾率が70%を越えると急激にKm値が大きくなったが、修飾率70%以下ではKm値は、未修飾体のそれとほぼ一致した。また、Vmaxは、修飾率の増大に従って低下した。未修飾体は60℃の加熱処理により失活したが、修飾体は70℃の熱処理後も90%以上の活性を保持していた。免疫反応性は、PEGの分子量が2,000と5,000の場合には、PEG修飾率の増大に伴って低下した。一方、PEGの分子量が12,000の場合には、Km、Vmaxとも未修飾体と変わらず、抗原性が顕著に低下した。しかし、全ての修飾体は、モルモットに対して極軽度なアナフィラキシー反応を示した。以上の結果より、A1-IIIの無抗原化には、エピトープ部位の除去が有効であることが示された。

glangacaccosis会产生多糖藻酸作为生物膜，并诱发传染病。生物膜细菌感染表明由于细菌盖的强抗生素而表现出顽固性。因此，去除生物膜可有效治疗可怕的生物膜细菌感染。在这项研究中，通过开发细菌藻酸二烯酸化酶（Algin衍生的RIASE：A1-III）作为生物膜去除剂来建立生物膜细菌感染的新疗法。今年，我们分析了适合破坏生物膜及其酶促和免疫学特性的抗原酶的制备。用N-Hydroki Cisque cisclinylation聚乙烯酯（PEG）（分子量：2,000、5,000和12,000）修饰A1-III赖氨酸残基。在磷酸50mm钾中，未毒剂装饰体的活性pH为7.5，但在PEG分子量的情况下，最佳pH值转移到酸性侧。非处方活性温度为65°C，但最佳温度在修饰符中转移到低温侧。无论钉子分子量的重量如何，当修饰速率超过70％时，km的值迅速增加，但以70％或更少的修饰速率，KM值几乎与未修饰的身体相同。随着修饰率的增加，VMAX也下降。由于加热60°C，未修饰的身体无活性，但是装饰性在70°C的热处理后保留了90％或更多。当PEG分子量为2,000和5,000时，由于PEG修饰速率的增加，免疫反应降低了。另一方面，如果PEG分子量为12,000，则抗原特性会大大降低，好像KM和VMAX不会改变。但是，所有修饰符均对豚鼠的过敏性反应非常轻。从上述结果中，它表明，取代位点的去除对A1-III的宴会有效。