バンコマイシン耐性腸球菌の新たな高頻度接合伝達性プラスミドの研究

新型耐万古霉素肠球菌超接合传播质粒的研究

基本信息

批准号：
13226009
负责人：
富田治芳
金额：
--
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は米国のVREに存在する主要な2種類の高頻度接合伝達性ゲンタマイシン耐性プラスミドと、我が国のVREから分離された高頻度接合伝達性プラスミドの分子遺伝学的研究を行い、以下の成果を得た。A.ゲンタマイシン耐性高頻度接合伝達性プラスミドの解析1)米国のE. faecium VREから5種類の高頻度接合伝達性ゲンタマイシン高度耐性プラスミド(A〜Eタイプ)を単離した。接合伝達性及びDNA相同性等の解析の結果、これらは最近我々が報告した、新たな高頻度接合伝達性ゲンタマイシン耐性プラスミドpMG1と類似のプラスミドであった。最も多く存在したA、BタイプについてトランスポゾンTn9171acを用いた変異株を各々約1000個作製した。伝達実験の結果、数十個の非伝達性変異プラスミドが得られた。現在これらの変異株について遺伝学的な解析を行っている。2)共存する非伝達性バンコマイシン耐性プラスミドへの影響実験的に、ゲンタマイシン耐性伝達性プラスミドは非伝達性バンコマイシンプラスミドpIP816を固形培地上で伝達させた。この機構はプラスミドの可動化と、2つのプラスミドの融合による伝達が関与していた。3)共存する低頻度伝達性バンコマイシン耐性プラスミドの伝達性への影響米国のE. faecium VREから、固形培地上で伝達可能なバンコマイシン耐性プラスミドを複数単離した。ゲンタマイシン耐性プラスミドが一部のバンコマイシン耐性プラスミドの伝達頻度を高めることを実験的に示した。B.日本のVREから分離された高頻度接合伝達性プラスミドの解析日本国内で分離されたE. faecium VREから高頻度接合伝達性プラスミドを3種類(A〜Cタイプ)単離した。これらはいずれもpMG1と類似のプラスミドであった。各々のプラスミドの制限酵素地図を決定したところ(64〜68kb)、それらは構造が一部異なるが、互いに類似していた。Aタイプのプラスミドを用い、トランスポゾンTn917lacによる挿入変異プラスミドを約1000個作製し、45個の伝達性変異プラスミドを得た。それらのトランスポゾンの挿入部位を解析した結果、プラスミド上の約3分の2以上の領域が伝達に関与していると考えられた。この領域を含む一部の塩基配列を決定し、変異株についての遺伝学的解析を行っている。

今年，我们对美国VRE中存在的两种主要类型的高频结合偶联性传输抗庆蛋素的质粒以及在日本从VRES中分离出的高频结合传输质粒的分子遗传研究，并获得了以下结果。分析抗庆蛋白抗性的高频共轭传递质粒1）从美国的E.粪肠球大肠杆菌VRE分离出五种类型的高度结合传递质粒（A型A型）。通过分析共轭可转移性和DNA同源性的结果，这些质粒类似于新的，高度频繁的可转移源自庆大霉素的质粒PMG1的质粒，我们最近报道。使用转座子TN9171AC的大约1,000个突变体针对最常见的A和B。传输实验导致数十个非传播突变质粒。目前，这些突变体正在进行遗传分析。 2）对共存的非翻译万古霉素质粒的影响，在实验上，将耐庆大霉素的传播质粒转移到固体培养基上的非传播万古霉素质粒PIP816中。该机制涉及通过两个质粒融合的质粒动员和传播。 3）从美国分离出可传播的低频透射万古霉素对透射型固体培养基的影响。我们通过实验表明，抗庆大霉素的质粒增加了一些抗性万古霉素质粒的传播频率。 B.分析从日本VRE分离出的三种高度频率共轭传输质粒（A型至C）的高度频率共轭传输的分析（从日本分离出的粪肠球大肠杆菌VRE）。所有这些都是类似于PMG1的质粒。确定每个质粒的限制酶图（64-68 kb），它们彼此相似，尽管部分不同的结构。使用A型A质粒制备了大约1,000个使用转子TN917LAC的插入突变质粒，并获得了45个转移突变质粒。在分析了这些转座子的插入位点后，人们认为质粒上大约三分之二或更多的区域参与了传播。已经确定了包含该区域的基本序列的一部分，并对突变菌株进行了遗传分析。