バンコマイシン耐性腸球菌の新たな高頻度接合伝達性プラスミドの研究

新型耐万古霉素肠球菌超接合传播质粒的研究

基本信息

批准号：
13226009
负责人：
富田治芳
金额：
--
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は米国のVREに存在する主要な2種類の高頻度接合伝達性ゲンタマイシン耐性プラスミドと、我が国のVREから分離された高頻度接合伝達性プラスミドの分子遺伝学的研究を行い、以下の成果を得た。A.ゲンタマイシン耐性高頻度接合伝達性プラスミドの解析1)米国のE. faecium VREから5種類の高頻度接合伝達性ゲンタマイシン高度耐性プラスミド(A〜Eタイプ)を単離した。接合伝達性及びDNA相同性等の解析の結果、これらは最近我々が報告した、新たな高頻度接合伝達性ゲンタマイシン耐性プラスミドpMG1と類似のプラスミドであった。最も多く存在したA、BタイプについてトランスポゾンTn9171acを用いた変異株を各々約1000個作製した。伝達実験の結果、数十個の非伝達性変異プラスミドが得られた。現在これらの変異株について遺伝学的な解析を行っている。2)共存する非伝達性バンコマイシン耐性プラスミドへの影響実験的に、ゲンタマイシン耐性伝達性プラスミドは非伝達性バンコマイシンプラスミドpIP816を固形培地上で伝達させた。この機構はプラスミドの可動化と、2つのプラスミドの融合による伝達が関与していた。3)共存する低頻度伝達性バンコマイシン耐性プラスミドの伝達性への影響米国のE. faecium VREから、固形培地上で伝達可能なバンコマイシン耐性プラスミドを複数単離した。ゲンタマイシン耐性プラスミドが一部のバンコマイシン耐性プラスミドの伝達頻度を高めることを実験的に示した。B.日本のVREから分離された高頻度接合伝達性プラスミドの解析日本国内で分離されたE. faecium VREから高頻度接合伝達性プラスミドを3種類(A〜Cタイプ)単離した。これらはいずれもpMG1と類似のプラスミドであった。各々のプラスミドの制限酵素地図を決定したところ(64〜68kb)、それらは構造が一部異なるが、互いに類似していた。Aタイプのプラスミドを用い、トランスポゾンTn917lacによる挿入変異プラスミドを約1000個作製し、45個の伝達性変異プラスミドを得た。それらのトランスポゾンの挿入部位を解析した結果、プラスミド上の約3分の2以上の領域が伝達に関与していると考えられた。この領域を含む一部の塩基配列を決定し、変異株についての遺伝学的解析を行っている。

今年，我们对美国VRE中存在的两种主要类型的高接合传播性庆大霉素抗性质粒和从日本VRE中分离出的高接合传播性质粒进行了分子遗传学研究，并获得了以下结果。庆大霉素抗性高接合传播质粒的分析1)从美国屎肠球菌VRE中分离出5种频繁接合传播庆大霉素高抗性质粒(A型至E型)。通过接合转移性和DNA同源性分析，这些质粒与我们最近报道的一种新的高度接合转移的庆大霉素抗性质粒pMG1相似。使用转座子 Tn9171ac 产生了大约 1,000 个 A 型和 B 型突变菌株，这是最丰富的。转移实验的结果是，获得了几十个不可转移的突变质粒。我们目前正在对这些突变菌株进行遗传分析。 2)对共存的非传染性万古霉素抗性质粒的影响实验上，使用庆大霉素抗性传播质粒在固体培养基上传递非传染性万古霉素质粒pIP816。该机制涉及通过两个质粒的融合进行质粒动员和转移。 3）共存的低频传播万古霉素抗性质粒对传播性的影响我们从美国屎肠球菌VRE中分离出多种可在固体培养基上传播的万古霉素抗性质粒。我们通过实验证明，庆大霉素抗性质粒会增加某些万古霉素抗性质粒的传播频率。 B.从日本VRE分离的高度接合转移质粒的分析从日本分离的屎肠球菌VRE中分离出三种类型的频繁接合转移质粒(A型至C型)。所有这些都是与pMG1相似的质粒。确定了每个质粒（64至68kb）的限制性酶切图谱，尽管它们的结构部分不同，但彼此相似。使用A型质粒创建了约1000个使用转座子Tn917lac的插入突变质粒，并获得了45个可传播的突变质粒。对这些转座子插入位点的分析表明，超过三分之二的质粒区域参与了传递。我们已经确定了该区域部分的核苷酸序列，并正在对突变菌株进行遗传分析。