DNAメチル化を用いた遺伝子診断法による早期診断法の確立

利用DNA甲基化的基因诊断方法建立早期诊断方法

基本信息

批准号：
13218110
负责人：
伊東文生
金额：
$ 4.74万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218110/
关键词：
消化器癌メチル化 MCA法アポトーシス潰瘍性大腸炎

项目摘要

MCA(methylated CpG island amplification)法を用いて、大腸癌細胞、膵癌細胞などより、メチル化のターゲット遺伝子の断片を100種類以上単離することに成功した。これらの断片より、プロモーター領域がメチル化することにより発現が低下する新規遺伝子として、カルシウムチャンネルに関連するCACNAIG遺伝子、アポトーシスに関連するHRK遺伝子、細胞周期に関連するCHFR遺伝子などを新規にクローニングすることに成功し得た。これらの遺伝子について、消化器癌細胞および消化器癌組織を用いてDNAメチル化の頻度をCOBRA(Combined bisulfite restriction analysis)法や、我々の開発したbisulfite-SSCP法を用いて検討を行った。いずれの遺伝子も消化器癌において高頻度にメチル化しかつ発現低下も認められること、この結果は種々の遺伝子に高頻度にメチル化を認める腫瘍(CpG island methylator phenotype-CIMP)においてさらに顕著であった。さらに、長期経過例の潰瘍性大腸炎の前癌病変である高度異型上皮において、加齢と共にメチル化の程度が亢進する遺伝子群(p16遺伝子exon1,MYOD遺伝子、ER遺伝子、CSPG2遺伝子)が高頻度にメチル化されていること、また、きわめて興味深いことに高度異型上皮を伴う潰瘍性大腸炎の非腫瘍部粘膜においても高頻度にメチル化していることが明らかになった。

利用MCA（甲基化CpG岛扩增）方法，我们成功从结肠癌细胞、胰腺癌细胞等中分离出100多种甲基化靶基因片段。从这些片段中，我们将成功克隆出由于其启动子区域甲基化而表达降低的新基因，例如与钙通道相关的CACNAIG基因、与细胞凋亡相关的HRK基因以及与细胞周期相关的CHFR基因。我们使用COBRA（联合亚硫酸氢盐限制性分析）方法和我们使用胃肠道癌细胞和胃肠道癌组织开发的亚硫酸氢盐-SSCP方法研究了这些基因的DNA甲基化频率。在胃肠道癌症中，所有基因都频繁甲基化，其表达也降低，并且这种结果在各种基因频繁甲基化的肿瘤（CpG岛甲基化表型-CIMP）中更为显着。此外，在作为长期溃疡性结肠炎癌前病变的高度非典型上皮中，经常发现甲基化水平随年龄增加的基因（p16基因外显子1、MYOD基因、ER基因、CSPG2基因）。研究还发现，甲基化频繁发生在上皮高度非典型的溃疡性结肠炎患者的非肿瘤粘膜中。