リン脂質代謝酵素による細胞運動の制御機構

磷脂代谢酶控制细胞运动的机制

基本信息

批准号：
13216111
负责人：
金保安則
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216111/
关键词：
ラッフル膜 EGF CrkII Rac1 ARF PIP 5-kinase

项目摘要

申請者は平成12年度に、EGF受容体を介したラッフル膜形成シグナル経路において、CrkIIが関与することを見出した。そこで、本年度は、CrkIIがどのような分子メカニズムでEGF受容体を介するラッフル膜形成に関与するのか、その詳細について解析し、以下の結果を得た。EGF受容体は、EGF刺激に伴いその細胞内C末端(細胞内)領域の5カ所のチロシン(Tyr)残基が自己リン酸化されてシグナルを下流へ伝達することが知られている。これらすべてのTyr残基をフェニールアラニンに置換した自己リン酸化されないEGF受容体変異体(F5-EGFR)を単独でCHO細胞に強制発現させてもEGFによるラッフル膜は形成されなかったが、興味深いことに、CrkIIと共発現させるとEGF刺激によりラッフル膜が形成されることを見出した。CrkIIはN末端側に一つのSH2ドメインをもち、そのC末端側に2つのSH3ドメインを有するが、C末端側1つのSH3ドメイン(C-SH3)でも全長CrkIIと同様に、F5-EGFRと共発現させるとEGF刺激によるラッフル膜形成が認められた。さらに、このF5-EGFRとCrkIIあるいはC-SH3を共発現させたCHO細胞におけるEGF依存的なラッフル膜形成は、ドミナントネガティブRac1により阻害された。これらの結果から、EGF受容体を介するラッフル膜形成シグナル伝達において、活性化されたEGF受容体からCrkIIへシグナルが伝達され、その下流でRac1が活性化されてラッフル膜形成に至るものと結論づけられる。また、このシグナル伝達においては、EGF受容体の自己リン酸化は必要でないことが明らかとなった。我々は、これまでにRac1によるラッフル膜形成は、ホスファチジルイノシトール(PI)4-リン酸(PI4P)をリン酸化してPI4,5-二リン酸を産生するPI4P5-キナーゼ(PIP 5-kinase)の活性化因子である低分子量Gタンパク質のARFにより仲介されている可能性を報告しているが、CrkIIを介するラッフル膜形成は、ドミナントネガティブARFによっても阻害された。このことより、EGFによるラッフル膜形成シグナル伝達は、EGF受容体→CrkII→Rac1→ARF→PIP 5-kinase経路であると考えられる。

申请人发现，CRKII将通过2000财年的EGF受体参与抽奖纪念途径。因此，今年，我们通过EGF受体分析了CRKII参与在抽奖膜形成中的细节，并使用了哪种分子机制。已知EGF受体在伴随EGF刺激的细胞C末端（细胞内）区域中具有五个酪氨酸（Tyr）残基，以向下游传播信号。即使所有这些Tyra残基被苯丙氨酸取代，自氧化的EGF受体Metaker（F5-EGFR）也被迫单独表达CHO细胞，但没有形成EGF的抽奖活动，但发现有趣的是。当用CrKII表达的EGF刺激形成抽奖膜。 CRKII在N端侧具有一个SH2域，在C端子侧有两个SH3域，但是C端子（C-SH3）（C-SH3）（例如CRKII）与F5一起使用一个SH3域（C-SH3）（C-SH3） -egfr。表达时，观察到了通过EGF刺激的胶片形成。此外，在CHO细胞中依赖EGF依赖性的抽奖膜形成，该细胞共同强调了F5-EGFR，CRKII或C-SH3，被主要的负RAC1抑制。从这些结果中可以得出结论，该信号是通过EGF受体正式传播的激活的EGF受体传播到CRKII的，Rac1在下游激活，并导致抽奖膜的形成。在此信号传输中，很明显，EGF受体的自氧化是不需要的。到目前为止，我们通过Rac1，PI4P5-激酶（PIP 5-激酶）形成抽奖膜，磷脂酰inoshitol（PI）4-磷酸（PI4P）产生PI4，5-两种磷酸。 ARF是一种低分子量G蛋白，这是一个活化因子，但是通过主要的负ARF抑制了通过CRKII形成的抽奖膜形成。由此，EGF的抽奖公式传递被认为是EGF受体→CRKII→RAC1→ARF→PIP 5-激酶路线。