リン脂質代謝酵素による細胞運動の制御機構

磷脂代谢酶控制细胞运动的机制

基本信息

批准号：
13216111
负责人：
金保安則
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216111/
关键词：
ラッフル膜 EGF CrkII Rac1 ARF PIP 5-kinase

项目摘要

申請者は平成12年度に、EGF受容体を介したラッフル膜形成シグナル経路において、CrkIIが関与することを見出した。そこで、本年度は、CrkIIがどのような分子メカニズムでEGF受容体を介するラッフル膜形成に関与するのか、その詳細について解析し、以下の結果を得た。EGF受容体は、EGF刺激に伴いその細胞内C末端(細胞内)領域の5カ所のチロシン(Tyr)残基が自己リン酸化されてシグナルを下流へ伝達することが知られている。これらすべてのTyr残基をフェニールアラニンに置換した自己リン酸化されないEGF受容体変異体(F5-EGFR)を単独でCHO細胞に強制発現させてもEGFによるラッフル膜は形成されなかったが、興味深いことに、CrkIIと共発現させるとEGF刺激によりラッフル膜が形成されることを見出した。CrkIIはN末端側に一つのSH2ドメインをもち、そのC末端側に2つのSH3ドメインを有するが、C末端側1つのSH3ドメイン(C-SH3)でも全長CrkIIと同様に、F5-EGFRと共発現させるとEGF刺激によるラッフル膜形成が認められた。さらに、このF5-EGFRとCrkIIあるいはC-SH3を共発現させたCHO細胞におけるEGF依存的なラッフル膜形成は、ドミナントネガティブRac1により阻害された。これらの結果から、EGF受容体を介するラッフル膜形成シグナル伝達において、活性化されたEGF受容体からCrkIIへシグナルが伝達され、その下流でRac1が活性化されてラッフル膜形成に至るものと結論づけられる。また、このシグナル伝達においては、EGF受容体の自己リン酸化は必要でないことが明らかとなった。我々は、これまでにRac1によるラッフル膜形成は、ホスファチジルイノシトール(PI)4-リン酸(PI4P)をリン酸化してPI4,5-二リン酸を産生するPI4P5-キナーゼ(PIP 5-kinase)の活性化因子である低分子量Gタンパク質のARFにより仲介されている可能性を報告しているが、CrkIIを介するラッフル膜形成は、ドミナントネガティブARFによっても阻害された。このことより、EGFによるラッフル膜形成シグナル伝達は、EGF受容体→CrkII→Rac1→ARF→PIP 5-kinase経路であると考えられる。

2000年，申请人发现CRKII参与EGF受体介导的抽奖膜形成途径。因此，今年，我们分析了哪种分子机制CRKII参与EGF受体介导的抽奖膜形成，并获得了以下结果。众所周知，当发生EGF刺激时，将酪氨酸（Tyr）残基在五个细胞内C末端（细胞内）区域自动磷酸化以向下游传输信号。尽管仅在CHO细胞中强迫表达非磷酸化的EGF受体突变体（F5-EGFR），在这种CHO细胞中，所有这些Tyr残基被苯丙氨酸代替并未形成带有EGF的荷叶膜，但有趣的是，与CRKII一起表达CRKII会导致ruffle egffe stroms egffipulation of crkii。 CRKII在N端侧具有一个SH2结构域，在C端侧具有两个SH3结构域，但是在C-terminus侧的一个SH3域（C-SH3）中，当与F5-EGFR共表达时，类似于全长的CRKII CRKII CRKKII，Raffle Membrane形成EGF刺激。此外，与CRKII或C-SH3共表达F5-EGFR的CHO细胞中EGF依赖性的荷叶膜形成受到显性负RAC1的抑制。这些结果得出的结论是，在EGF受体介导的荷叶膜形成信号传导中，信号从激活的EGF受体传播到CRKII，Rac1在其下游激活，从而导致荷叶膜形成。还已经表明，该信号不需要EGF受体的自磷酸化。 We have previously reported that ruffle membrane formation by Rac1 may be mediated by ARF of the low molecular weight G protein, an activator of PI4P5-kinase (PIP 5-kinase), which phosphorylates phosphatidylinositol (PI)4-phosphate (PI4P) to produce PI4,5-diphosphate, but CrkII-mediated ruffle membrane formation was also inhibited由主要负ARF。这表明EGF通过EGF受体→CRKII→RAC1→ARF→PIP 5-激酶途径。