がん細胞の増殖とカベオリン

癌细胞增殖和小窝蛋白

基本信息

批准号：
13216085
负责人：
石川義弘
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ラット筋芽細胞H9C2、心筋組織、血管平滑筋細胞を用いてカベオリン分画の精製を行い、増殖刺激に関与するα1アドレナリン受容体および下流の信号分子の発現分布を検討した。α1受容体、G蛋白質Gq、PLC.βサブタイプ(β1、3)はカベオリン分画に発現が限局していた。さらにα1受容体とカベオリンは免疫沈降実験によって、強く共役していることがわかった。また肥大した心筋細胞でのカベオリン発現を調べ、カベオリン3の発現が有意に肥大心筋において減少していることを見出した。これからカベオリン3の発現低下が、増殖信号の脱抑制を生み、最終的に肥大化をもたらしたと推測された。2.培養筋原性腫瘍細胞においてカベオリンを誘導性に過大発現させる系を作成し、細胞増殖性と増殖性信号伝達における変化を検討した。カベオリン過大発現によって、カベオリン蛋白は3倍程度に上昇し、形態学的にも細胞膜陥凹構造であるカベオラ数の増大が見られた。カベオリン分画を精製して、発現されたリコンビナントカベオリンの細胞内分布を調べたところ、内因性のものと相違は見られなかった。アンギオテンシン刺激によるERK活性化はカベオリン発現細胞において有意に低下しており、2%FBS刺激存在下で^3Hチミジン取込みを検討した結果、取込み率の有為な減少がみられた。これらの抑制効果はカルシウムキレートやPKC阻害剤によって消失したから、カルシウム感受性PKCサブタイプによる関与が推測された。3.アデニル酸シクラーゼをサブタイプ選択的に制御する薬物を開発した。各サブタイプをバキュロウイルスシステムにより過大発現させ、フォルスコリン誘導体とコンピュータを用いた立体構造解析から選択された既知の化合物のスクリーニングを行った。この結果、2、3、5サブタイプのそれぞれに選択性を持つ刺激薬を見つけた。さらに5サブタイプを選択的に抑制する新規化合物を発見した。

1.我们利用大鼠成肌细胞H9C2、心肌组织和血管平滑肌细胞纯化caveolin组分，并研究α1-肾上腺素受体和参与增殖刺激的下游信号分子的表达分布。 α1 受体、G 蛋白 Gq 和 PLC.β 亚型 (β1, 3) 的表达仅限于小窝蛋白部分。此外，免疫沉淀实验表明α1受体和caveolin是强耦合的。我们还研究了肥厚心肌细胞中caveolin的表达，发现肥厚心肌细胞中caveolin 3的表达显着降低。这表明小窝蛋白 3 的表达减少会导致增殖信号去抑制，最终导致肥大。 2.我们创建了一个系统，其中caveolin在培养的肌源性肿瘤细胞中诱导性过度表达，并检查了细胞增殖和增殖信号转导的变化。 Caveolin的过度表达使caveolin蛋白的水平增加了约3倍，并且形态学上显示caveolae的数量增加，caveolae是细胞膜中的凹入结构。当我们纯化小窝蛋白部分并检查表达的重组小窝蛋白的细胞内分布时，我们发现与内源性小窝蛋白没有差异。在表达小窝蛋白的细胞中，血管紧张素刺激引起的 ERK 活化显着降低，并且当在 2% FBS 刺激存在的情况下检查 ^3H 胸苷掺入时，观察到掺入率显着降低。这些抑制作用被钙螯合物和 PKC 抑制剂消除，表明钙敏感的 PKC 亚型参与其中。 3.我们开发了一种选择性调节腺苷酸环化酶的药物。使用杆状病毒系统过表达每种亚型，并筛选选自毛喉素衍生物的已知化合物并使用计算机进行3D结构分析。结果，他们发现了一种对 2、3 和 5 亚型具有选择性的兴奋剂。此外，我们发现了一种新化合物，可以选择性抑制五种亚型。