神経細胞およびグリア細胞の変性におけるApaf1依存性アポトーシスの解析

神经元和胶质细胞变性中 Apaf1 依赖性细胞凋亡的分析

基本信息

批准号：
13210111
负责人：
吉田裕樹
金额：
$ 3.46万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13210111/
关键词：
Apaf1 ニューロンアポトーシスミトコンドリア

项目摘要

これまで、ミトコンドリア依存性アポトーシスにおけるアダプター分子Apaf1を欠損するマウスを作成し、Apaf1が胎仔脳に強く発現することやApaf1欠損胎仔ではニューロンのアポトーシスが生じずニューロンの蓄積による脳の変形が生じることを報告してきた。本研究の目的は、Apaf1欠損神経上皮細胞、ニューロン、グリア細胞に様々なアポトーシス誘導刺激を加え、アポトーシス抵抗性を指標に、これらの細胞におけるミトコンドリア依存性アポトーシスの関与を解析することである。Apaf1欠損胎仔よりえたニューロンをbFGF存在下で4日培養し、この後抗がん剤エトポシドやキナーゼ阻害剤スタウロスポリンで刺激したところ、Apaf1欠損細胞では野生型に比べ細胞死抵抗性、およびカスパーゼ活性化の低下がみられ、これらの刺激によりApaf1依存性アポトーシスが活性化することが示された。さらに、同じ細胞にNMDA刺激を加え興奮性細胞死を誘導したところ、Apaf1欠損細胞において若干の細胞死抵抗性が見られ、NMDA刺激によるカルシウム上昇依存性の細胞死にもApaf1の関与が示唆された。さらに、同じ細胞に小胞体ストレス刺激を誘導する目的でthapsigarginを加えたところ、やはりApaf1欠損細胞において細胞死抵抗性が見られた。小胞体ストレスにおいては、カスパーゼ12が活性化することが報告されているが、詳細なアポトーシス誘導機構は明らかではないため、カルシウム依存性アポトーシス誘導経路とともにApaf1を介したアポトーシス経路の関与を詳細に解析していく予定である。

到目前为止，我们已经创建了线粒体依赖性细胞凋亡中缺乏接头分子Apaf1的小鼠，并证明Apaf1在胎儿大脑中强表达，并且在Apaf1缺陷的胎儿中，不会发生神经元凋亡，并且由于神经元的影响而发生大脑变形。我已经举报了。本研究的目的是将各种凋亡诱导刺激应用于Apaf1缺陷的神经上皮细胞、神经元和神经胶质细胞，并以凋亡抗性为指标分析这些细胞中线粒体依赖性凋亡的参与情况。来自Apaf1缺陷胎儿的神经元在bFGF存在下培养4天，然后用抗癌药物依托泊苷和激酶抑制剂星形孢菌素刺激，与野生型A相比，Apaf1缺陷细胞表现出细胞死亡抗性和半胱天冬酶抗性降低。观察到激活，表明这些刺激激活 Apaf1 依赖性细胞凋亡。此外，当用 NMDA 刺激相同的细胞以诱导兴奋性细胞死亡时，在 Apaf1 缺陷细胞中观察到了对细胞死亡的一些抵抗力，这表明 Apaf1 也参与了依赖于 NMDA 刺激诱导的钙升高的细胞死亡。此外，当将毒胡萝卜素添加到相同的细胞中以诱导内质网应激刺激时，在Apaf1缺陷的细胞中也观察到对细胞死亡的抵抗力。有报道在内质网应激中caspase-12被激活，但详细的细胞凋亡诱导机制尚不清楚，因此我们将详细分析Apaf1介导的细胞凋亡途径的参与以及钙依赖性细胞凋亡我们计划这样做。