内分泌かく乱物質が生殖器に及ぼす作用機構の解析

内分泌干扰物对生殖器官的作用机制分析

基本信息

批准号：
13027253
负责人：
佐々木順造
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

内分泌撹乱物質の生体影響、特に精巣に及ぼす影響を、プラスチックの可塑剤であるフタル酸エステルについて解析した。35日令のウィスター系ラットにDi (2-ethylhexy1) phthalate DEHPを2g/kg経口投与した後、0-24時間後に精巣を摘出し、エポン包埋し、トルイジンブルー染色した標本を光学顕微鏡で観察すると、6-9時間後に精細管に変性した精母細胞、多核精子細胞が増加するのが観察された。また、DEHP投与により、精巣のO_2^-やH_2O_2などの産生が増加する事、精巣の主要な抗酸化物であるグルタチオンやアスコルビン酸などの濃度が低下すること、精巣から分離したミトコンドリアを用いた実験により、DEHPの代謝産物であるモノエステル(MEHP)がチトクロームCを著明に遊離させることが判明した。この際、形態学的にもTUNEL染色陽性細胞が検出された。本陽性細胞はニトロチロシン抗体でも強く染色され、活性酸素とNOによる酸化ストレスが増強していることが明らかにされた。DEHPによる精巣変化は、その代謝産物のMEHPがミトコンドリアに作用して酸化ストレスを増強し、これにより生殖細胞がアポトーシスを誘起するためであることが示唆された。更に、DEHP投与ラット精巣のmRNAより^<32>P標識したcDNAを合成し、cDNAマイクロアレイを用いて、その遺伝子発現パターンを解析した。その結果、フタル酸エステル投与群において、testis lipid-binding protein (TLBP)など、数種の蛋白の遺伝子発現が著明に減少していた。これら、数種の遺伝子について、文献から得られたcDNA配列をもとにプローブを作成し、in situハイブリダイゼーション法により形態学的観察を行っている。

分析了内分泌干扰物的生物学作用，特别是在睾丸上，分析了邻苯二甲酸酯的生物学作用，邻苯二甲酸酯是塑料的增塑剂。 After oral administration of 2g/kg of Di(2-ethylhexy1)phthalate DEHP to 35-day-old Wistar rats, testes were removed 0-24 hours later, Epon-embedded, and toluidine blue stained specimens were observed under a light microscope, and spermatocytes denatured into seminiferous tubules increased 6-9 hours later. Furthermore, DEHP administration increased the production of O_2^- and H_2O_2 in the testes, decreased the concentration of glutathione and ascorbic acid, which are the major antioxidants of the testes, and experiments using mitochondria isolated from the testes revealed that monoesters (MEHP), a metabolite of DEHP, markedly releases cytochrome C. At this time,从形态上讲，检测到TUNEL染色阳性细胞。阳性细胞还用亚硝基酪氨酸抗体对阳性细胞进行了强烈染色，并且发现由活性氧引起的氧化应激和NO增强。据建议，由DEHP引起的睾丸改变是因为其代谢物MEHP作用于线粒体，以增强氧化应激，从而诱导生殖细胞凋亡。此外， ^<32> p标记的cDNA是从DEHP administer的大鼠大鼠睾丸中合成的，并使用cDNA微阵列分析了基因表达模式。结果，邻苯二甲酸酯基团显着降低了几种蛋白质的基因表达，例如睾丸脂质结合蛋白（TLBP）。根据从文献获得的cDNA序列为这些基因制备探针，并通过原位杂交进行形态学观察。