HIV-1 RevによるウイルスmRNA核外輸送系の作動機作解析

HIV-1 Rev对病毒mRNA核输出系统的机制分析

基本信息

批准号：
13015225
负责人：
木村富紀
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13015225/
关键词：
HIV-1 Rev mRNA核外輸送イントロンレスmRNA CRM1 Ran CTE mRNA輸送因子の階層性

项目摘要

我々はこれ迄に、HIV-1 Rev蛋白の共発現がルシフェラーゼ(Luc)cDNA発現ベクターpRSVluc-wtの活性を抑制し、これがmRNAの核外輸送の抑制に原因する事から、イントロンを持たないmRNAの核外輸送において、Revを介したウイルスmRNAの核外輸送の場合と共通の細胞因子が利用される可能性を示してきた。本年度は、このLuc mRNA核外輸送の抑制がイントロンを持たない事に起因することを明らかにするため、同ベクター3'非翻訳領域にβ-globinのイントロン(pRSVluc-int)或いはSRV-1 CTE配列(pRSVluc-CTE)を挿入し、Rev発現の影響を見た。その結果、Revの共発現はint-Luc mRNA核外輸送には影響しなかったが、CTE-Luc mRNAの輸送を抑制した。この核外輸送抑制は、wt-Luc mRNAの場合と同様、Ranの共発現で解除される事から、CTEを介したmRNA輸送にもRanが関与する事が示唆された。一方、Rev核外輸送シグナルレセプターCRM1の阻害薬LMBの効果を検討したところ、wt-Luc mRNAの核外輸送のみが抑制されたにも関わらず、CRMIに結合し機能を抑制するnucleoporin CANのドミナントネガティブ変異体ΔCANの共発現は、wt-とint-Luc mRNAの双方の輸送を抑制した。これらの事実は、イントロンレスmRNAの核外輪送においては、Rev依存性RNA核外輸送系と同様、Ran及びCRM1が共通に利用されるが、スプライシングを受けたmRNAの輸送には、代わってCAN結合性の第2の輸送因子であるTAPが関与する可能性を示す。従って、RevによるイントロンレスmRNAの核外輸送抑制は、イントロンの有無により輸送因子が使い分けられる結果、後者がRevと因子を共有するようになった為と考えられた。

我们之前报道过 HIV-1 Rev 蛋白的共表达抑制了荧光素酶 (Luc) cDNA 表达载体 pRSVluc-wt 的活性，并且这抑制了 mRNA 的核输出，我们已经证明与 Rev- 中相同的细胞因子。病毒mRNA介导的核输出可用于病毒的核输出。今年，为了澄清Luc mRNA核输出的抑制是由于缺少内含子所致，我们将在Luc mRNA的3'非翻译区插入一个β-球蛋白内含子（pRSVluc-int）或SRV-1 CTE。插入相同的载体（pRSVluc-CTE）并检查Rev表达的效果。结果，Rev的共表达不影响int-Luc mRNA核输出，但抑制CTE-Luc mRNA转运。与 wt-Luc mRNA 的情况一样，Ran 的共表达缓解了这种核输出抑制，表明 Ran 也参与了 CTE 介导的 mRNA 转运。另一方面，当我们检查Rev核输出信号受体CRM1的抑制剂LMB的作用时，我们发现虽然仅抑制wt-Luc mRNA的核输出，但它是与CRMI结合的显性核孔蛋白CAN并抑制其功能。负突变体 ΔCAN 的共表达抑制了 wt- 和 int-Luc mRNA 的转运。这些事实表明，在无内含子mRNA的核输出中，常用Ran和CRM1，类似于Rev依赖性RNA核输出系统，但对于剪接mRNA的运输，则使用CAN，这表明了这种可能性。 TAP（第二个结合转运因子）也参与其中。因此，Rev对无内含子mRNA的核输出的抑制被认为是由于根据内含子的存在或不存在而使用不同的转运因子，并且后者与Rev共享因子。