転写制御タンパク質機能ドメインの大量発現および高次構造解析

转录调节蛋白功能域的大规模表达和构象分析

• 批准号: 13014203
• 负责人: 菊池 康夫
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014203/
• 关键词: 転写因子; DNA結合タンパク質

本研究では外界シグナルに応じて遺伝子の発現調節をおこなう転写制御タンパク質機能の特徴ある機能ドメインの構造解析をめざすと同時に新たな情報伝達因子の探索、機能解析を通じて遺伝子発現制御の機構を解明することを目的とする。1 BTEBのDNA結合ドメインの高次構造解析薬物代謝酵素CP1A1遺伝子の構成的転写調節配列BTEに結合するBTEBのDNA結合ドメインはC2H2型Zn-フィンガーモチーフとそのN端に隣接する塩基性領域も含む。このドメインの13-C、15-N二重ラベル体を大量調製し稲垣冬彦教授(北大)のご幸力でNMRスペクトルを解析し、精密化を行った。さらにDNA複複合体形成を確認しその至適化をおこなった。2 共発現法によるPASドメイン二量体の大量発現CYP1A1遺伝子の誘導的転写調節配列XRE配列には受容体型転写因子AhRとArntのヘテロ二量体が結合する。両者のDNA結合ドメインにはbHLHとPASモチーフがある。PAS領域は大腸菌で発現させると大部分が不溶性タンパク質のなるのでAhRとArntを大腸菌で共発現させたところタンパク質の溶解性は格段に向上し強いXRE配列結合活性をもつヘテロ二量体が生成した。この二量体をAhR-Arnt-XRE三成分複合体とし大量精製する方法を確立した。またヘテロ二量体のDNA(XRE配列)結合体の解離定数を10nMと決定した。(発表準備中)。3 薬物代謝酵素CYP1A2の発現調節CYP1A2の発現はCYP1A1と同様にAhR/Arntヘテロ二量体が必要であるが遺伝子の発現調節領域に直接結合する因子は未知であった。マウス肝臓からこの因子を精製し、LBP-1と同定した。また、LBP-1とAhR、Arntとの協調によるCYPIA2の発現調節モデルを明らかにした。(発表準備中)4 低酸素シグナルにおよぼすNOの役割低酸素状態における血管新生やがん組織の増殖に関わるHIFの成分HIF1-αはbHLH-PASドメインを持つ転写因子である。HIF1-αのPro(564)をO2依存的に水酸化するProlyl HydroxylaseはNO(Nitric oxide)によって低酸素状態でも酵活性が上昇しHIF1-αの活性化を抑えることを見いだした(発表準備中)

在这项研究中，目的是分析功能域的结构分析，该功能域的特征是传递控制蛋白函数，该功能根据外国世界信号协调基因的表达，同时探索新​​信息传播因子并阐明基因表达控制的机制。 1 BTEB DNA结合结构域高阶结构分析药物代谢酶CP1A1可构型转移调节阵列BTEB DNA结合结构域的结合与BTE的结合，包括C2H2型Zn手指基序和与其N End n End。的基本区域该领域的13-C和15-N双标签大量制备，并用Inagaki Fuyuhiko（北海道大学）教授的力量分析了NMR光谱，并精确。此外，确认了DNA双重复合物组合形成并进行了优化。 2）当前法律CYP1A1大量的PAS结构域两种质量诱导的CYP1A1基因诱导的转移调节阵列XRE序列是受体转录因子AHR和ARNT Hetero Hetero Dual Bodies。两个DNA结合结构域都有BHLH和PAS基序。在PAS区域，大多数PA在大肠杆菌中表达，因此，当AHR和ARNT是大肠杆菌中的Co-偶像时，蛋白质的溶液已得到显着改善，并且已经产生了具有强Xre序列活性的异源体。 。质量精炼的方法是作为AHR-ARNT-XRE三形复合物确定的。另外，确定杂环体的DNA（XRE序列）结合体的解剖常数确定为10 nm。 （准备公告）。 3。药物代谢酶CYP1A2的CYP1A2的表达需要双层AHR/ARNT杂型体，例如CYP1A1，但直接与基因表达配方面积直接结合的因素尚不清楚。该因子从小鼠肝脏纯化，并被鉴定为LBP-1。此外，揭示了LBP-1，AHR和ARNT合作中的CYPIA2表达调整模型。 （准备演示）4 HIF成分HIF1-α与低氧信号中低氧状态下血管和癌组织的生长有关，是具有BHLH-PAS结构域的转录因子。羟化酶（羟化酶）羟化酶（氢氧化物HIF1-αPRO（564））也被发现甚至在低氧气中也会增加发酵，没有（一氧化氮）（一氧化氮）并抑制HIF1-α的激活（准备公告宣布。