マウス着床モデルを用いた免疫系細胞による胚着床促進機構の解析

利用小鼠着床模型分析免疫系统细胞促进胚胎着床的机制

基本信息

批准号：
12671594
负责人：
中山貴弘
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12671594/
关键词：
免疫担当細胞着床胚盤胞妊娠マウス HB-EGF LIF 浸潤

项目摘要

1.妊娠マウスにおける末梢血免疫担当細胞の着床胚に対する発育促進作用を解析する目的で、マウス胚盤胞を細胞外器質より成るマトリゲル上に配置し、さらにマウス脾臓細胞を様々な細胞濃度でマトリゲル外側に配置し、共培養を行った。これにより脾臓細胞由来液性因子のマウス胚盤胞の進展や浸潤に及ぼす作用を検討した結果、非妊娠時および妊娠時の脾臓細胞との共培養によりマトリゲル上でのマウス胚盤胞の進展や浸潤は有意に促進された。また、この促進効果は妊娠時の脾臓細胞でより顕著であり、細胞濃度依存性に増強される傾向が認められた。2.偽妊娠およびDelayed implantation状態のRecipient ICR系マウスに、妊娠マウス脾臓細胞を胚移植とともに静脈内に投与すると、Recipient子宮が着床許容状態となり、移植胚の着床が成立することを報告したが、この機序を解明するため着床期の子宮での発現が報告されている着床関連物質のmRNA発現の妊娠マウス脾臓細胞投与による変化を、Northern blotting法により時間経過を追って検討した。検討した物質は子宮内腔上皮のマーカーとしてMuc-1およびHB-EGF、腺上皮のマーカーとしてLIF、間質のマーカーとしてCOX-2であり、HB-EGF、LIFおよびCOX-2の発現が妊娠マウス脾臓細胞投与により誘導されることが明らかとなった。3.現在、上記実験系において子宮における形態学的変化と着床関連物質の発現部位とをHE染色および免疫組織化学染色法を用いて検討し、妊娠脾臓細胞投与による着床時期の変化を形態学的に確認している。またFITCラベルした脾臓細胞を静注後に子宮を摘出して蛍光顕微鏡下に観察し、投与細胞の子宮内における動態を検討中である。

1。为了分析外周血免疫细胞对植入小鼠植入小鼠的发育效果，将小鼠胚泡放在基质凝胶上，该胚胎由细胞外器官组成，将小鼠脾细胞置于多种细胞浓度的外部矩阵外部，并共培养。结果，我们研究了脾细胞衍生的体液因子对小鼠胚泡的发育和侵袭的影响，并在非怀孕和妊娠期间与脾细胞共培养，显着促进了小鼠胚泡对Matrigel的发育和侵袭。此外，在怀孕期间，这种启动子效应在脾细胞中更为明显，并且有可能增加细胞浓度的趋势。 2。我们报告说，当怀孕的小鼠脾细胞被静脉内用胚胎转移到伪孕和延迟植入态的受体ICR小鼠时，子宫的植入物变得可植入，并维持植入物中的植入物。为了阐明这种机制，我们研究了植入相关物质的mRNA表达的变化，据报道，植入阶段的子宫表达，通过使用Northern blotting在孕妇脾脏脾细胞中脾细胞的给药。所检查的物质是MUC-1和HB-EGF作为子宫腔上皮的标志物，LIF为腺上皮的标志物，而Cox-2作为基质的标志物，并且揭示了HB-EGF，LIF和COX-2的表达是由孕妇细胞的Spleen细胞诱导的。 3。目前，在上述实验系统中，使用He染色和免疫组织化学染色检查了子宫和植入相关物质部位的形态变化，并在形态上证实了由于孕妇脾细胞的施用而导致的植入时间变化。此外，静脉注射后去除FITC标记的脾细胞，并在荧光显微镜下观察子宫，以检查子宫中施用细胞的动力学。