マウス着床モデルを用いた免疫系細胞による胚着床促進機構の解析

利用小鼠着床模型分析免疫系统细胞促进胚胎着床的机制

基本信息

批准号：
12671594
负责人：
中山貴弘
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12671594/
关键词：
免疫担当細胞着床胚盤胞妊娠マウス HB-EGF LIF 浸潤

项目摘要

1.妊娠マウスにおける末梢血免疫担当細胞の着床胚に対する発育促進作用を解析する目的で、マウス胚盤胞を細胞外器質より成るマトリゲル上に配置し、さらにマウス脾臓細胞を様々な細胞濃度でマトリゲル外側に配置し、共培養を行った。これにより脾臓細胞由来液性因子のマウス胚盤胞の進展や浸潤に及ぼす作用を検討した結果、非妊娠時および妊娠時の脾臓細胞との共培養によりマトリゲル上でのマウス胚盤胞の進展や浸潤は有意に促進された。また、この促進効果は妊娠時の脾臓細胞でより顕著であり、細胞濃度依存性に増強される傾向が認められた。2.偽妊娠およびDelayed implantation状態のRecipient ICR系マウスに、妊娠マウス脾臓細胞を胚移植とともに静脈内に投与すると、Recipient子宮が着床許容状態となり、移植胚の着床が成立することを報告したが、この機序を解明するため着床期の子宮での発現が報告されている着床関連物質のmRNA発現の妊娠マウス脾臓細胞投与による変化を、Northern blotting法により時間経過を追って検討した。検討した物質は子宮内腔上皮のマーカーとしてMuc-1およびHB-EGF、腺上皮のマーカーとしてLIF、間質のマーカーとしてCOX-2であり、HB-EGF、LIFおよびCOX-2の発現が妊娠マウス脾臓細胞投与により誘導されることが明らかとなった。3.現在、上記実験系において子宮における形態学的変化と着床関連物質の発現部位とをHE染色および免疫組織化学染色法を用いて検討し、妊娠脾臓細胞投与による着床時期の変化を形態学的に確認している。またFITCラベルした脾臓細胞を静注後に子宮を摘出して蛍光顕微鏡下に観察し、投与細胞の子宮内における動態を検討中である。

1.为了分析外周血免疫活性细胞对怀孕小鼠植入胚胎的生长促进作用，将小鼠囊胚置于由细胞外组织制成的Matrigel上，并添加不同细胞浓度的小鼠脾细胞。置于 Matrigel 外部并共培养。通过研究脾细胞源性体液因子对小鼠囊胚发育和侵袭的影响，我们发现与非妊娠和妊娠脾细胞共培养可显着促进基质胶浸润上小鼠囊胚的发育。。此外，这种促进作用在妊娠期间的脾细胞中更为明显，并且倾向于以细胞浓度依赖性方式增强。 2.我们报道，当将怀孕的小鼠脾细胞与胚胎移植一起静脉注射给处于假妊娠或延迟着床状态的受体ICR小鼠时，受体子宫变得允许着床，并且移植的胚胎成功着床。为了阐明这一机制，我们通过使用Northern印迹法给予怀孕小鼠脾细胞，检查了植入相关物质的mRNA表达随时间的变化，据报道这些物质在植入期间在子宫中表达。所检查的物质是作为子宫腔上皮标记物的Muc-1和HB-EGF、作为腺上皮标记物的LIF以及作为间质标记物的COX-2。结果表明，这种效果是通过给予小鼠脾细胞来诱导的。。 3.目前，在上述实验系统中，我们正在使用HE染色和免疫组织化学染色检查子宫的形态变化和着床相关物质的表达位点，并正在研究给药引起的着床时间的形态变化科学证实了怀孕的脾细胞。我们还通过静脉注射 FITC 标记的脾细胞后切除子宫并在荧光显微镜下观察来研究子宫内给药细胞的动态。