GLUT4の比較分子生物学―鳥類における高血糖維持機構―

GLUT4的比较分子生物学 - 鸟类高血糖维持机制 -

基本信息

批准号：
12876058
负责人：
秋葉征夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12876058/
关键词：
GLUT4 グルコーストランスポーター高血糖鶏インスリン抵抗性 GLUT GLUTmRNA

项目摘要

本研究では高血糖およびインスリン抵抗性を特徴とする鶏の特異的な血糖維持機構を解明する観点で、グルコースの取り込みを担うインスリン感受性グルコーストランスポーター(GLUT4)の分子生物学的追究を行った。これまで鶏(鳥類全体)においてGLUT4の存在が予測されてきたが、存在の確証は得られていない。(1)ノーザンブロットによる検索 : 鶏のほとんど全ての組織(19部位)に対し、ラットGLUT4 cDNAプローブを用いたノーザンブロットを、非常に弱い条件(40-60%の相同性を持つ配列に結合)で行ったが、鶏の全ての組織においてシグナルは検出されなかった。(2)RT-PCRによる検索これまでラット、マウス、ウシおよびヒトでGLUT4がクローニングされている。GLUT4は種を超えて非常に高い相同性があり、また保存されている領域も多い。そこでGLUT4遺伝子の全ての共通配列部分からオリゴヌクレオチドを設計し、骨格筋、心筋、脂肪組織および肝臓を対象としてRT-PCRを行った。得られたPCR産物全てにおいてシーケンスを行ったが、他種動物のGLUT4と相同性のあるものは得られなかった。(3)サザンブロットによる検索鶏肝臓から抽出したゲノムDNAにおいてラットGLUT4 cDNAプローブを用いたサザンブロットを行った。ノーザンブロットと同様に非常に弱い条件で行ったが、鶏ゲノムにおいてシグナルは検出されなかった。(4)他鳥類におけるGLUT4のクローニングカモ、ウズラの組織のノーザンブロット、サザンプロットおよびRT-PCRを行ったが、いずれの組織においても他種動物のGLUT4と相同性のあるものは得られなかった。以上の結果から、鶏においてインスリン感受性のGLUT4は存在しない可能性が強く示された。このように、鶏の高血糖や高インスリン抵抗性の根拠を分子生物学的に提示した。

在这项研究中，我们对负责葡萄糖摄取的胰岛素敏感葡萄糖转运蛋白（GLUT4）进行了分子生物学探索，以阐明鸡在鸡的特定血糖维持机制，其特征是高血糖症和胰岛素抵抗。在鸡（所有鸟类）中预测了Glut4的存在，但没有获得其存在的证据。（1）通过北印迹进行搜索：使用大鼠Glut4 cDNA探针进行北印迹，在非常弱的条件下（与40-60％同源性的序列结合），几乎所有鸡肉（19个地点）（19个地点）进行了，但在所有鸡肉组织中均未检测到任何信号。（2）RT-PCR GLUT4的搜索已在大鼠，小鼠，牛和人类中克隆。 GLUT4在整个物种之间具有很高的同源性，并且存在许多保守的区域。因此，从GLUT4基因的所有共有序列部分设计寡核苷酸，并在骨骼肌，心肌，脂肪组织和肝脏上进行RT-PCR。对获得的所有PCR产物进行了测序，但是与GLUT4同源的所有PCR产物都没有进行测序。（3）使用从鸡肝中提取的基因组DNA上使用大鼠GLUT4 cDNA探针进行Southern印迹Southern印迹搜索。与北印迹类似，结果是在非常弱的条件下进行的，但在鸡基因组中未检测到信号。（4）在其他鸟类中对Glut4的克隆进行克隆，北印迹，南部绘制和鹌鹑组织的RT-PCR，但没有获得其他物种中Glut4同源的组织。上述结果强烈表明胰岛素敏感的GLUT4可能不存在于鸡中。因此，在生物学上给出了高血糖和鸡在鸡的高胰岛素抵抗的基础。