毒化ホタテガイ中腸腺における麻痺性貝毒結合タンパク

中毒扇贝中肠腺中的麻痹性贝类毒液结合蛋白

基本信息

  • 批准号:
    12876049
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.96万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2000
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2000 至 2001
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

毒化したホタテガイ中腸腺より水溶性タンパクおよび膜結合タンパク画分を得、両タンパク画分をサキシトキシン(STX)に対する抗体を用いたwestem blot分析にかけたところ、両者共に抗体と反応する複数のタンパクバンドを観察した。抗体と反応するバンドは膜結合タンパク画分に強く認められた。westem blotにおける抗体との反応を指標にこれらタンパクの精製を試みたが、精製過程でタンパクのバンドが変化し、タンパクの分解が起こっていることが考えられた。この原因は現在のところ不明で、ホタテガイ試料からは毒が結合したタンパクの精製が困難であった。そこで市販のメタロチオネインに毒を結合させた標品を用い、タンパクと毒との結合様式を検討した。まず毒を結合させたメタロチオネインをゲルろ過および抗STX抗体をリガンドとするアフィニティクロマトグラフィーで精製し、これをproteaseで分解した。分解物をGSHと毒の複合体(GS-STXs)分析用に開発したHPLCに付したところ、GS-STXsとは異なる位置に1本のピークを与えた。用いたproteaseは非特異的なものであるので、peptideは完全に加水分解されたと考えられ、HPLCで検出された分解物はシステインと毒の複合体であることが考えられた。これに対し、PSPの代謝研究においてシステインと結合した毒は速やかに分解されることが明らかにされている。したがって本研究で認められた分解物中のピークは毒とシステインの複合体とは考えにくく、その性状を明らかにする必要がある。今回は試料の量的制約からこれ以上の検討は出来なかったが、今後毒化ホタテガイ中の毒結合タンパクについても同様のprotease処理を行い、毒と結合している分解物の性状を明らかにしていく予定である。
从中毒的扇贝中肠腺中获得水溶性蛋白和膜结合蛋白部分,当使用抗石房蛤毒素(STX)抗体对这两种蛋白部分进行蛋白质印迹分析时,在细胞中检测到多个与抗体反应的蛋白条带。观察到两种蛋白质组分。在膜结合蛋白级分中强烈观察到与抗体反应的条带。我们试图以蛋白质印迹中与抗体的反应为指标来纯化这些蛋白质,但蛋白质条带在纯化过程中发生了变化,表明蛋白质发生了降解。目前其原因尚不清楚,并且很难从扇贝样品中纯化毒素结合蛋白。因此,我们使用市售的金属硫蛋白与毒物结合的制剂来研究蛋白质与毒物之间的结合模式。首先,使用抗STX抗体作为配体,通过凝胶过滤和亲和层析纯化与毒素结合的金属硫蛋白,然后用蛋白酶消化。将分解物供于分析GSH与毒素复合物(GS-STX)而开发的HPLC时,在与GS-STX不同的位置得到了1个峰。由于所使用的蛋白酶是非特异性的,因此认为肽已经完全水解,并且通过HPLC检测到的分解产物被认为是半胱氨酸和毒物的复合物。相比之下,PSP 的代谢研究表明,与半胱氨酸结合的毒素被迅速降解。因此,本研究中观察到的分解产物中的峰不太可能是毒物和半胱氨酸的复合物,其性质有待澄清。虽然由于样本数量的限制,这次我们无法进行进一步的调查,但我们计划对中毒扇贝中的毒液结合蛋白进行类似的蛋白酶处理,以澄清与毒液结合的分解产物的性质。

项目成果

期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Setsuko Sakamoto,Masaaki Kodama et al.: "Formation of intermediate conjugates in the reductive transformation of gonyautoxins to saxitoxins by thiol compounds"Fisheries Science. 66巻. 136-141 (2000)
Settsuko Sakamoto、Masaaki Kodama 等:“硫醇化合物将膝沟藻毒素还原转化为石房蛤毒素时形成中间缀合物”,渔业科学 66. 136-141 (2000)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Masaaki Kodama: "Seafood and Freshwater Toxins : Pharmacology, Physiology, and Detection (Botana,L.M.,Ed.) Part 6.Paralytic Shellfish Poisoning"Marcel Dekker,Inc. : New York, Basel. 798 (2000)
Masaaki Kodama:“海鲜和淡水毒素:药理学、生理学和检测(Botana,L.M.,编辑)第 6 部分。麻痹性贝类中毒”Marcel Dekker, Inc.
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
K.Sekiguchi,M.Kodama et al.: "Accumulation of paralytic shellfish toxins in the scallop Patinopecten yessoensis caused by the dinoflagellate Alexandrium catenella in Otsuchi Bay, lwate Prefecture, northem Pacific coast of Japan"Fisheries Science. (in pres
K.Sekiguchi、M.Kodama 等人:“日本北太平洋沿岸岩手县大槌湾的甲藻链状亚历山大藻导致扇贝虾夷扇贝中麻痹性贝类毒素的积累”《渔业科学》。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
S.Sato,R.Sakai.,M.Kodama: "Identification of thioether intermediates in the reductive transformation of gonyautoxins into saxitoxins by thiols."Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 10巻. 1787-1789 (2000)
S. Sato、R. Sakai.、M. Kodama:“硫醇将膝沟藻毒素还原转化为石房蛤毒素时的硫醚中间体的鉴定”,《生物有机和药物化学快报》第 10 卷,1787-1789(2000 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Sigeru Sato,Masaaki Kodama et al.: "Frequent occurrence of paralytic shellfish poisoning toxins as dominant toxins in marine puffer from tropical water"Toxicon. 38巻. 1101-1109 (2000)
Sigeru Sato、Masaaki Kodama 等人:“热带水域的海洋河鲀中经常出现麻痹性贝类中毒毒素”Toxicon 38. 1101-1109 (2000)。
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知道了