転写因子GATA-2の造血幹細胞と白血病細胞における発現と機能

转录因子GATA-2在造血干细胞和白血病细胞中的表达及功能

• 批准号: 12217019
• 负责人: 峯岸 直子
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217019/
• 关键词: 転写調節機構; GATA-2; 白血病; 造血幹細胞; 血管内皮細胞; 緑色蛍光蛋白質; トランスジェニックマウス; 遺伝子破壊マウス; 転写調節機構; GATA-2; 白血病; 造血幹細胞; 血管内皮細胞; 緑色蛍光蛋白質; トランスジェニックマウス; 遺伝子破壊マウス

マウス,ヒトのGATA-2遺伝子構造を決定し,それらがアミノ酸をコードしない第一エクソンを2つ持つこと,遠位側の第一エクソン(IS)からの転写が血液系の細胞や発生途上の神経組織で特異的に起きていることを明らかにした。ISエクソンから上流7kbpまでの領域を緑色蛍光蛋白質(GFP)遺伝子に結合しマウス受精卵に導入してトランスジェニックマウス作成したところ,このマウスでは,卵黄嚢,大動脈生殖隆起中腎(AGM)領域,胎仔肝臓の主な胎児期の造血組織にGFPの蛍光を認めた。このマウスの胎仔肝臓のGFP陽性細胞は造血幹細胞のマーカーを発現し,コロニー形成能を持っていた.また,AGM領域でGFPを発現する細胞の表面マーカー解析,血液細胞への分化能の検討により,GATA-2が造血幹細胞と血管内皮細胞の共通の母細胞であるヘマンジオブラストにおいて発現することを明らかにした.さらに,内在性のGATA-2の発現を緑色蛍光蛋白質の蛍光で再現するマウスと,血液系でのGATA-2発現を特異的に制御するISプロモーターの活性を再現するマウスを遺伝子相同組み換え法により作成し,これらマウスを使って造血幹細胞の移植実験等を行い,GATA-2が骨髄造血幹細胞で発現していることを明らかにした.GATA-2遺伝子領域の転写活性をトランスジェニックマウス法で検討し,上流3.1kbpまでの領域に造血組織での転写に必要な活性があることを,2.4kbpまでの領域に胎児期の神経系での発現に必要な活性があることを明らかにした.この領域の中には,DNaseI高感受性領域とほぼ一致して,種間で塩基配列の保存性の高い領域が存在し,これらが転写制御に重要なシス配列である可能性が示唆された.

确定了小鼠和人的GATA-2基因结构，并揭示它们有两个不编码氨基酸的第一个外显子，并且远端第一外显子（IS）的转录特别发生在血细胞中并发育神经组织。当从IS外显子上游的区域与绿色荧光蛋白（GFP）基因结合并引入受精小鼠时，小鼠是通过创建转基因小鼠和蛋黄囊，主动脉味mesdonymia（AGM）区域（AGM）区域以及主要的胎儿胎儿血瘤组织和胎儿胎儿胎儿胎儿组织的主要症状。该小鼠的胎儿肝脏中的GFP阳性细胞表达了造血干细胞的标志物，并且具有菌落形成潜力。此外，通过分析在AGM区域表达GFP的细胞的表面标记并检查分化对血细胞的分化潜力，可以发现GATA-2在HemangeColast中表达，这是造血干细胞和血管内皮细胞之间的常见母细胞。此外，通过绿色荧光蛋白和小鼠的荧光再现了重现IS启动子活性的小鼠，该荧光的荧光是通过基因同源重组产生的，该启动子在血液系统中特别调节了血液系统中的GATA-2表达。使用这些小鼠，我们对造血干细胞进行了实验，以揭示GATA-2在髓样造血干细胞中表达。我们使用转基因小鼠方法研究了GATA-2基因区域的转录活性，并揭示了高达3.1 kbp的上游区域具有造血组织中转录所需的活性，并且高达2.4 kbp的上游区域在胎儿神经系统中表达了2.4 kbp所需的活性。在这些区域中，有一些区域对物种之间的碱基序列的保守性很高，几乎与高度敏感的DNAsei区域一致，这表明这些可能是对转录调控很重要的顺式序列。