がん浸潤における細胞運動とMMP発現の協調的制御機構の解析

肿瘤侵袭过程中细胞运动与MMP表达协同调控机制分析

• 批准号: 12215052
• 负责人: 滝野 隆久
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215052/
• 关键词: 細胞運動; CrkII; Scaffold protein

1.CrkIIは種々のシグナル分子と結合することで情報伝達を制御しているアダプター分子である。CrkIIは221番目のチロシンがリン酸化されることで不活性化される。CrkIIによる細胞運動制御機構の解明を目的として、CrkII変異体を用いてCrkIIチロシンリン酸化の細胞運動に対する影響を検討した。細胞に過剰発現されたCrkIIは約40%がチロシンリン酸化され、チロシン脱リン酸化酵素PTP1Bとの共発現によって脱リン酸化された。CrkIIのSH3変異体発現はファイブロネクチン(FN)上でのHT1080細胞運動を抑制した。リン酸化チロシン変異体CrkII-Y221F発現は細胞運動を誘導するのに対して、野生型CrkII発現では認められなかった。CrkII-Y221F発現による細胞運動誘導に一致してCrkII-Y221Fはp130cas、paxillinとの結合増大が認められた。また、CrkII-Y221Fにより誘導されるlamellipodia様構造形成および細胞運動はDN-Rac1発現により抑制された。CrkIIの221番目のチロシンリン酸化がFN上でのHT1080細胞運動を誘導するFAK/p130cas/CrkII経路を制御していることが明かとなった。2.MAPK Scaffold proteinとFAKFAKはFN刺激によりErkおよびJNKを活性化する。このMAPK活性化は細胞増殖、細胞分化、細胞運動の制御に必要である。最近同定されたMAPKのScaffold proteinはMAPK、MAPKK、MAPKKKと結合することでJNK活性化の足場として反応を促進する。一方でErk活性化に対しては抑制的に働きシグナル伝達の特異性を規定する因子であると考えられる。FAKを介したシグナル伝達の特異性にこのScaffold proteinが関与しているのではないかと仮定し、FAKを介した情報伝達系におけるScaffold proteinの役割を検討した。MAPK Scaffold proteinはFAKのN-末端と結合し、FAK-Src複合体形成にともないFAKへの結合増大、チロシンリン酸化されることが分かった。このScaffold proteinのチロシンリン酸化はY397F-FAK変異体の発現やSrcの不活性化により減少することから、FAKがScaffold proteinを細胞接着斑にリクルートし、Srcがチロシンリン酸化すると考えられた。FAKはMAPK Scaffold proteinを介してより選択的にMAPKを制御し、細胞増殖、細胞分化、細胞運動を調節していると考えられる。

1。CRKII是一种衔接子分子，通过与各种信号分子结合来调节信号传导。 CRKII通过位置221的酪氨酸磷酸化而被灭活。为了阐明CRKII的细胞运动机理，我们研究了CRKII酪氨酸磷酸化对CRKII突变体细胞运动的影响。在细胞中过表达的CRKII的大约40％被酪氨酸磷酸化，并通过与酪氨酸去磷酸化酶PTP1B共表达磷酸化并去磷酸化。 CRKII SH3突变体的表达抑制了纤连蛋白（FN）上HT1080细胞运动。磷酸化的酪氨酸突变体CRKII-Y221F的表达诱导细胞运动，而野生型CRKII表达则未观察到。与CRKII-Y221F表达诱导细胞运动的诱导一致，CRKII-Y221F增加了与P130CA和Paxillin的结合。另外，通过DN-RAC1表达抑制了由CRKII-Y221F诱导的层状结构形成和细胞运动。据表明，CRKII第221位的酪氨酸磷酸化调节了FN上诱导HT1080细胞运动的FAK/P130CAS/CRKII途径。 2。MAPK支架蛋白和Fakfak通过FN刺激激活ERK和JNK。这种MAPK激活是细胞增殖，细胞分化和细胞运动所必需的。最近确定的MAPK的支架蛋白与MAPK，MAPKK和MAPKKK结合，以促进反应作为JNK激活的支架。另一方面，人们认为这是抑制ERK激活并调节信号传导特异性的因素。我们假设该支架蛋白可能与FAK介导的信号传导的特异性有关，并检查了支架蛋白在FAK介导的信号传导系统中的作用。发现MAPK支架蛋白与FAK的N末端结合，酪氨酸磷酸化为FAK-SRC复合物。由于该支架蛋白的酪氨酸磷酸化通过Y397F-FAK突变体的表达和SRC失活而降低，因此人们认为FAK募集了支架蛋白质对细胞粘附，而SRC磷酸化酪氨酸。人们认为FAK通过MAPK支架蛋白更有选择地调节MAPK，并调节细胞增殖，细胞分化和细胞运动。

项目成果

H.Miyamori: "Human Membrane Type-2 Matrix Metalloproteinase is defective in cell-associated activation of progelatinase A."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 796-800 (2000)

H.Miyamori：“人膜 2 型基质金属蛋白酶在原明胶酶 A 的细胞相关激活中存在缺陷。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 796-800 (2000)