転移性上皮癌ワクチン開発の基礎的研究

转移性上皮癌疫苗开发的基础研究

基本信息

批准号：
12213135
负责人：
七條茂樹
金额：
$ 2.69万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213135/
关键词：
癌拒絶抗原細胞傷害性T細胞ペプチド抗原 lck 転移癌異所性発現

项目摘要

食道癌患者末梢血より樹立した細胞傷害性T細胞(KE4-CTL)を用いて新たにクローニングした遺伝子の塩基配列がlckと同じであった。本遺伝子産物のp56^<lck>は、リンパ球系細胞の増殖や機能発現に関与する事はよく知られているが、転移性大腸癌や肺癌の一部でも異所性に発現している事から、本分子が転移癌と関連した癌ワクチンの候補になり得るかどうかを検討した。(a)lckは正常細胞・組織ではType IIプロモーターが関与しているのに対して、癌細胞では主にType Iが関与していることがRT-PCRで確認され、タンパク質レベルでは両者共同じ易動度のタンパク質としてウエスタンブロット法で検出された。(b)タンパク質の発現は正常細胞でも認められたがKE4-CTLは認識しなかった。しかし、癌細胞と正常細胞に対するCTLの認識の違いに関する機序に関しては現在のところ明らかではない。(c)HLA-A24結合モチーフを有するペプチドを合成し、C1R/A*2402細胞株と反応させた後CTLが産生するIFN-γを測定し、KE4-CTLがHLA-A24拘束性に認識するペプチド抗原を3種類(Lck208-218,Lck486-494およびLck488-497)同定した。次に、患者末梢血PBMCをこれらの3種類のペプチド抗原で刺激し、限界希釈法でCTLの誘導頻度を計算で求め、CTL前駆細胞の割合を予測した。KE4細胞株に特異的なCTLのin vitroでの誘導を試みたところ、転移癌患者ではペプチド刺激していない群でも前駆細胞が認められ、刺激することにより増強されることが示唆されたが、非転移癌患者および健常人では前駆細胞出現頻度の増強は認められなかった。以上の実験成績から、本ペプチドが、特に転移癌の癌ワクチン候補となりうることが示唆された。

使用从食管癌患者外周血建立的细胞毒性T细胞(KE4-CTL)新克隆的基因的碱基序列与lck相同。众所周知，该基因产物 p56^<lck> 与淋巴细胞的增殖和功能表达有关，但它也在一些转移性结肠癌和肺癌中异位表达，因此，我们研究了该分子是否可以被表达。与转移性癌症相关的癌症疫苗的候选者。 (a)在正常细胞和组织中，II型启动子参与lck，而在癌细胞中，通过RT-PCR证实主要参与I型启动子，并且在蛋白质水平上，两者被检测到是相同的。通过蛋白质印迹检测为高度流动的蛋白质。 (b)在正常细胞中也观察到蛋白质表达，但KE4-CTL不识别它。然而，癌细胞和正常细胞之间CTL识别差异的机制目前尚不清楚。 (c)合成带有HLA-A24结合基序的肽并与C1R/A*2402细胞系反应后，测量CTL产生的IFN-γ，KE4-CTL以HLA-A24限制性方式识别它鉴定出三种类型的肽抗原（Lck208-218、Lck486-494 和 Lck488-497）。接下来，用这三种肽抗原刺激患者的外周血PBMC，使用有限稀释法计算CTL诱导频率，并估计CTL祖细胞的百分比。当我们尝试体外诱导 KE4 细胞系特异性 CTL 时，甚至在非肽刺激组中也观察到了转移性癌症患者的祖细胞，这表明祖细胞的频率并未因刺激而增强。在非转移性癌症患者和健康个体中观察到。上述实验结果表明，该肽可能是癌症疫苗的候选者，特别是针对转移性癌症。