全長cDNAライブラリーを用いたマラリア原虫ゲノムの遺伝子発現制御の総合的研究

使用全长 cDNA 文库全面研究疟原虫基因组中的基因表达调控

基本信息

批准号：
12206023
负责人：
渡辺純一
金额：
--
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12206023/
关键词：
マラリア cDNA 全長ライブラリー

项目摘要

マラリアは年間200万人もの死亡者を生じる最大の熱帯病である。原因となる熱帯熱マラリア原虫のゲノム解読は、国際コンソーシウムによって開始され、すでに、第2・第3染色体の全塩基配列が決定され、14本の染色体上に存在する3000万塩基のゲノムの全塩基配列が解読される日も間近に迫っている。そこで重要になるのが発現遺伝子の解析である。我々は、独自に開発したオリゴキャップ法を用いて赤内型培養原虫から全長cDNAライブフリーを作成し、そのうち2490クローンの5'端をワンパスシークエンスした。これらを、第2染色体、および、第3染色体の塩基配列と比較したところ、前者に3種、後者に1種の新規遺伝子が同定された。なかでも、1遺伝子は16個ものエクソンを有していた。既知遺伝子クローンの分析から、全長率はおよそ50%と推定された。同一遺伝子の5'UTR端の分析では、5'端がクローンによって著しく分散する傾向を示していた。塩基配列は、データベース化し、医科研内のホームページで公開した(FULL-malaria http://133.11.149.55/)。また、新規マラリアワクチンを開発する目的で、ネズミマラリア原虫から、全長cDNAライブラリーを作成した。マウスに2000クローンのプラスミドをDNAワクチンとして投与し、その後、原虫を接種感染して生存に与える影響を観察した。その結果、意外なことに、ワクチン投与群は、コントロール群より、生存期間が短縮しており、この条件では、ワクチンが悪影響を示すことが明らかになった。ワクチンのスクリーニングは始まったところである。今後、条件を変えてさらに検討を行いたい。

疟疾是最大的热带疾病，每年导致多达 200 万人死亡。一个国际联盟已开始对引起疟疾的恶性疟原虫进行基因组测序，破译碱基序列的日子即将到来。这里重要的是表达基因的分析。我们使用原始的oligo-cap方法从培养的原生动物中创建了活的全长cDNA，并对2490个克隆的5'端进行了一次性测序。当将它们与2号和3号染色体的碱基序列进行比较时，在前者中鉴定出3个新基因，在后者中鉴定出1个新基因。特别是一个基因有多达 16 个外显子。根据对已知基因克隆的分析，估计全长比例约为 50%。对同一基因的 5'UTR 末端的分析表明，5' 末端有明显分散在克隆中的趋势。核苷酸序列被编入数据库并发布在医学科学研究所的主页上（FULL-malaria http://133.11.149.55/）。此外，为了开发新的疟疾疫苗，我们从鼠疟疾寄生虫中创建了全长 cDNA 文库。我们将 2000 个质粒克隆作为 DNA 疫苗注射给小鼠，然后给它们接种原生动物并观察对生存的影响。结果，令人惊讶的是，接种组的存活期比对照组短，并且很明显疫苗在这些条件下产生了不利影响。疫苗筛选才刚刚开始。今后我想通过改变条件进行进一步的调查。