B細胞分化・多様化を制御する抗原受容体シグナルにおけるBASH/BLNKの役割

BASH/BLNK 在控制 B 细胞分化和多样化的抗原受体信号中的作用

基本信息

批准号：
12051238
负责人：
北村大介
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

B細胞特異的アダプターBASH/BLNKを欠損するマウスを作製し解析したところ、キメラマウスの解析結果と一致して、成熟B細胞の減少、BCR刺激に対する低反応、腹腔B1細胞の欠如、抗体産生低下、骨髄大型プレB細胞の蓄積などがみられた。脾臓B細胞のL鎖は、正常では約6%がλ鎖陽性であったが、BASH-/-B細胞では約1-2%にすぎなかった。また、κ鎖遺伝子のRS組換えがBASH-/-B細胞では減少していた。これより、BASH-/-B細胞は分化過程でreceptor editingを起こす頻度が低下していると考えられた。従って、BASH-/-マウスでは自己抗原に対するトレランスが不十分である可能性がある。一方、IgH a/b両アレルを有するBASH-/-マウスを作製して、H鎖対立遺伝子排除を調べたが、両アレルを同時に発現するB細胞は骨髄にも脾臓にもなく、H鎖対立遺伝子排除は正常であった。また、BASH-/-未熟B細胞は正常B細胞と比べて培養中にアポトーシスを起こしやすかった。以上の結果より、BASHは1)骨髄未熟B細胞において自己抗原認識によって誘導されるreceptor editing、2)末梢B細胞の定常状態での生存、を誘導するBCRからのシグナル伝達に重要であるが、H鎖対立遺伝子排除を誘導するpreBCRシグナル伝達には必要でないことが新たに明らかになった。BASHのC末端に位置するSH2ドメインの機能を理解するために、SH2ドメインに結合する蛋白を探索した。その結果、BCR刺激後チロシンリン酸化されたHPK1が直接このSH2ドメインに結合することを見出した。HPK1はMAP4Kに属するSer/Thrキナーゼで、造血系細胞に選択的に発現するが、その役割は不明であった。さらに我々は、BCR刺激によりHPK1キナーゼ活性が誘導され、この活性化にはBASHのSH2ドメインとの結合が必要であることを明らかにした。

当我们生成并分析缺乏 B 细胞特异性接头 BASH/BLNK 的小鼠时，我们发现成熟 B 细胞减少、对 BCR 刺激的反应低、腹膜 B1 细胞缺失以及抗体产生减少，与分析结果一致嵌合体小鼠中，观察到骨髓大前B细胞的积累。大约6%的正常脾B细胞呈λ链阳性，但只有大约1-2%的BASH-/-B细胞呈阳性。此外，BASH-/- B 细胞中 κ 链基因的 RS 重组减少。这表明 BASH-/- B 细胞在分化过程中不太可能经历受体编辑。因此，BASH-/-小鼠可能对自身抗原的耐受性不足。另一方面，产生具有两种 IgH a/b 等位基因的 BASH-/- 小鼠来研究 H 链等位基因排除，但在骨髓或脾脏中没有表达两种等位基因的 B 细胞，并且在骨髓或脾脏基因排除正常。此外，BASH-/-未成熟的B细胞在培养过程中比正常B细胞更容易发生凋亡。从以上结果来看，BASH对于BCR的信号转导很重要，其诱导1)骨髓未成熟B细胞中自身抗原识别诱导的受体编辑，以及2)外周B细胞的稳态存活。诱导 H 链等位基因排除的 preBCR 信号传导不需要蛋白质。为了了解位于 BASH C 末端的 SH2 结构域的功能，我们寻找与 SH2 结构域结合的蛋白质。结果，我们发现酪氨酸磷酸化的 HPK1 在 BCR 刺激后直接与该 SH2 结构域结合。 HPK1是属于MAP4K的Ser/Thr激酶，在造血细胞中选择性表达，但其作用尚不清楚。此外，我们发现 BCR 刺激会诱导 HPK1 激酶活性，并且这种激活需要与 BASH 的 SH2 结构域结合。