ヤドクガエルAtelopus.zetekiの毒zetekitoxinの構造解析

箭毒蛙 Atelopus.zeteki 毒泽特毒素的结构分析

• 批准号: 12045210
• 负责人: 山下 まり
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12045210/
• 关键词: ゼテキトキシン; カエル; 毒; サキシトキシン

中南米に生息するAtelopus(ヤセヤドクガエル)属のカエルの多くは、主に皮膚に水溶性毒を有する。1975年にコスタリカ産のAtelopus属のカエルからtetrodotoxinが同定されたが、zetekitoxinはすでに1969年に、Furman,Mosherによってパナマ産のA.zetekiに存在する新規の水溶性低分子毒として報告された。しかし、zetekitoxinは、その後、A.zetekiが保護条約下に置かれ、試料が入手出来なくなったことから、その構造は発見から約30年間未定であった。韓国科学技術院のY.H.Kim教授から規制前に精製された半精製品及び精製品のzetekitoxinを供与された。本研究は立体構造を含めたzetekitoxinの構造決定を行うことを目的とした。1.精製Biogel P-2,BioRex70,Hitachi gel3011Cを用いたHPLCで半精製品のzetekitoxinを精製し、純品を約300-400μg得た。2.性状FT-IR(ZnSe)1702,1561,1421,1338,1268cm^<-1>;HR-ESIMS[M+H]^+m/z553.1369(calcd for[C_<16>H_<25>N_8O_<12>S_1]^+m/z553.1313.[M-SO_3+H]^+m/z473.1725(calcd for[C_<16>H_<25>N_8O_9]^+m/z473.1744.この結果から、硫酸エステルの存在が示唆された。TLC(Silica gel 60)Pyr-EtOAc-AcOH-H_2O(15:7:3:6)Rf0.57(tetrodotoxin:0.50,saxitoxin:0.36).saxitoxinと同様に1%H_2O_2/H_2O(v/v)噴霧、加熱後にUV365nmで蛍光スポットとして検出された。3.NMRスペクトルと平面構造の推定NMRスペクトルは全て4%CD_3COOD/D_2O中、20℃か30℃で測定した。^1H-^1HCOSY,TNTOCSY,HSQC,HMBC,NOESY,NOE差,^<13>C NMRスペクトルの解析から、saxitoxin骨格を部分構造にウレタン、N-OHをもつ、非常に特異な新規構造を推定した。

许多生活在中美洲和南美洲的阿特洛普斯（Atelopus）青蛙的皮肤中主要含有水溶性毒素。 1975 年，在哥斯达黎加的 Atelopus 属青蛙中发现了河豚毒素，但 Furman 和 Mosher 已于 1969 年报道了 zetekitoxin，它是巴拿马 A. zeteki 中存在的一种新的水溶性低分子量毒素。然而，zetekitoxin 的结构在其发现后约 30 年内仍未确定，因为 A.zeteki 随后受到保护条约的保护，无法再获取样本。韩国科学技术院的 Y.H. Kim 教授提供了在法规之前纯化的半纯化和纯化的泽特毒素产品。本研究的目的是确定泽特毒素的结构，包括其三维结构。 1.纯化半纯化产物泽特毒素通过HPLC使用Biogel P-2、BioRex70和Hitachi gel3011C纯化，得到约300-400μg纯产物。 2.性能FT-IR(ZnSe)1702,1561,1421,1338,1268cm^<-1>;HR-ESIMS[M+H]^+m/z553.1369(计算值对于[C_<16>H_<25>N_8O_<12>S_1]^+m/z553.1313.[M-SO_3+H]^+m/z473.1725(计算为[C_<16>H_<25>N_8O_9]^+m/z473.1744。该结果表明存在硫酸酯(TLC)。 60) Pyr-EtOAc-AcOH-H_2O(15:7:3:6)Rf0.57(河豚毒素:0.50,石房蛤毒素:0.36).与石房蛤毒素类似,1%H_2O_2/H_2O(v/v)喷雾,加热后UV365nm萤火虫3. NMR谱和估计的平面结构所有NMR谱均在20℃或30℃下以4％CD_3COOD/D_2O差值^ 13 C测量。通过核磁共振谱分析，我们推导出一种新的、非常独特的结构，其石房蛤毒素骨架含有氨基甲酸酯和N-OH作为部分结构。

项目成果

Y.Shoi.,M.Yotsu-Yamashita et al.: "Electrospray Ionization Mass Spectrometry of Tetrodotoxin and its Analogs : Liquid Chromatography/Mass Spectrometry, Tandem Mass Spectrometry, and Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry"Anal, Biochem.. 290(1). 10

Y.Shoi.，M.Yotsu-Yamashita 等人：“河豚毒素及其类似物的电喷雾电离质谱法：液相色谱/质谱、串联质谱和液相色谱/串联质谱”Anal，Biochem.. 290（

E.J.Nunez-Vazquez,M,Yotsu-Yamashita et al.: "Toxicities and distribution of tetrodotoxin in the tissues on puffer fish found in the coast of the Baja California Peninsula, Mexico."Toxicon. 38. 729-734 (2000)

E.J.Nunez-Vazquez,M,Yotsu-Yamashita 等人：“墨西哥下加利福尼亚半岛海岸发现的河豚毒素的毒性和组织中的分布。”Toxicon。

M.Yotsu-Yamashita. et al.: "The levels of tetrodotoxin and its analogue 6-epitetrodotoxin in the red-spotted newts, Notophthalmus viridescens."Toxicon. (in press). (2001)

M.四山下。

H.Yotsu-Yamashita, et al.: "Binding Properties of ^3H-PbTx-3 and 3H-saxitoxin to Brain Membranes and to Skeletal Muscle Membranes of Puffer Fish Fugu pardalis, and the Primary Structure of a Voltage-Gated Na^+ Channel α-Subunit (fMNal) from Skeletal Muscl

H. Yotsu-Yamashita 等人：“^3H-PbTx-3 和 3H-石房蛤毒素与河豚河豚脑膜和骨骼肌膜的结合特性，以及电压门控 Na^+ 的一级结构来自骨骼肌的通道 α 亚基 (fMNal)