標的分子であるTBPに結合した転写活性化ドメインの立体構造解析

与靶分子TBP结合的转录激活域的三维结构分析

基本信息

批准号：
12034215
负责人：
古久保哲朗
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12034215/
关键词：
転写因子基本転写因子転写制御転写転写調節機構構造解析 TFIID TAF

项目摘要

転写制御機構を理解するためには、転写活性化ドメイン(AD)とその標的分子の間に成立する蛋白質間相互作用の実体を明らかにする必要がある。われわれはTFIIDサブユニットであるyTAF145/dTAF230のN末端にTBPと極めて強く結合し、その機能を阻害する活性領域(TAND)を同定し、TANDが役割分担の異なる二個の小サブドメイン(TAND1,TAND2)から構成されること、TAND1はADと多くの機能的な共通点を持つことなどを明らかにしてきた。またすでにIkuraらにより、ショウジョウバエ由来のdTAND1がTATAボックスの分子擬態を利用してTBPに結合していることが明らかにされている。その後の詳細な解析からdTAND1が二個のyTAND1相当領域を内包する可能性が示されたため、それぞれについてTBPとの複合体形成を試みたが、yTAND2との融合蛋白質のin vitroにおけるTBP結合活性はいずれも極めて低いものであった。そこで今回dTAND1-dTAND2間に本来挿入されているspacer領域(78-115aa)の機能に新たに注目し、in vivo及びin vitroにおいて種々の解析を行った。その結果、(1)spacer領域の付加はin vivoにおいて野生型orキメラ型TANDを持つyTAF145蛋白質全長の発現を抑制すること、(2)spacer領域をC端側に融合することにより転写活性化ドメインの活性が顕著に低下すること、(3)spacer領域の挿入によりdTANDIN(or C)-yTAND2融合蛋白質のTBP結合能がわずかながら増大することなどが明らかとなった。以上の結果は、spacer領域が単なるリンカーではなく、少なくともショウジョウバエのTFIIDにおいてはTAND1,TAND2と同様にTBPと可逆的に結合する第三のサブドメインとして機能していることを強く示唆している。

为了理解转录控制机制，有必要阐明转录激活域（AD）与其靶分子之间发生的蛋白质-蛋白质相互作用的实质。我们在 TFIID 亚基 yTAF145/dTAF230 的 N 末端发现了一个活性区域 (TAND)，它与 TBP 结合极强，并抑制其功能。已表明 TAND1 由 TAND2 组成，并且 TAND1 与 TAND1 有许多功能相似之处。广告。此外，Ikura 等人已经揭示，果蝇衍生的 dTAND1 利用 TATA 盒的分子模拟与 TBP 结合。随后的详细分析表明，dTAND1可能含有两个yTAND1等价区域，因此我们尝试将它们分别与TBP形成复合物，但与yTAND2融合蛋白的体外TBP结合活性两个值都极低。因此，我们重新关注最初插入dTAND1和dTAND2之间的间隔区（78-115aa）的功能，并在体内和体外进行了各种分析。结果，(1) 间隔区的添加抑制了体内野生型或嵌合 TAND 的全长 yTAF145 蛋白的表达，(2) 间隔区与 C 末端的融合抑制了(3)间隔区的插入略微增加了dTANDIN(或C)-yTAND2融合蛋白的TBP结合能力。这些结果强烈表明，间隔区不仅仅是一个接头，而且还充当可逆地结合 TBP 的第三个子结构域，至少在果蝇 TFIID 中，与 TAND1 和 TAND2 类似。