転写終結因子Rhoの終結シグナル識別機構

转录终止因子Rho的终止信号识别机制

基本信息

批准号：
62580210
负责人：
重定勝哉
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

転写終結因子ρ蛋白の機能的特色は転写産物RNAを相互作用の標的とすること, およびそれにATPase反応が共役していることにある. 本研究ではこうした反応の分子的基盤を解明するために, 先に分離した変異ρ因子を利用して以下の解析を行った.1.変異部位の同定とその機能的効果-数種の変異ρ遺伝子のDNA塩基配例を決定し, それに基き蛋白一次構造を解読したところ, 構成アミノ酸419個中, 計4箇所の残基に変異が見出された. さらに各残基は次のようにそれぞれ異る機能に関連することが示された-残基3, 長鎖RNA結合能;残基156, ATPase反応と転写終結の共役;残基304および323, 短鎖RNA相互作用.2.転写終結シグナルの同定-上記変異ρ因子中, 323番残基の置換したものは同時に転写終結部位特異性が変化していた. そこで, 正常部位と異常部位の周辺のRNA塩基配列を詳細に比較したところ, 3′末端数残基に系統的な差があり, 野生型ρはアデニンに富む配列を選り好みするのに対し, 変異型ρは逆にそれを忌避することが判明した. 従ってρはRNA鎖の3′最末端部の配列を終結シグナルとして識別している可能性が新たに示唆された.3.ρ蛋白の機能ドメイン編成-ρ蛋白の一次・二次構造を既知のATPaseのそれと比較したところρ蛋白の中央約200残基に共通性が認められ, この領域がATPase活性を担う機能ドメインを構成するものと推定された. これより上述の変異箇所中, 156, 304, 323番残基は直接または間接にATPaseドメインに関連すること, 対して3番残基は別のドメインに属することが判った. 以上の結果から, ρ因子とRNA間の相互作用の様式とρ蛋白の機能ドメイン構成について重要な手掛りが得られた. これらの知見を基に, ρ因子の分子作用機構を更に掘下げて行きたい.

转录终止因子ρ蛋白的功能特征是其靶向转录产物RNA并且与ATPase反应偶联，在本研究中，为了阐明该反应的分子基础，利用先前分离的突变ρ因子，我们进行了以下分析： 1. 突变位点及其功能效应的鉴定 - 我们确定了几个突变ρ基因的DNA碱基序列，并基于这些序列，我们在破译后确定了419个组成氨基酸的蛋白质一级结构。 ,此外，在总共四个残基中发现了突变，如下所示：残基 3，长 RNA 结合能力；残基 156，ATP 酶反应和转录终止残基的偶联； 2.转录终止信号的鉴定-在上述突变ρ因子中，取代的残基323也表现出转录终止位点特异性。对正常位点和异常位点周围的RNA碱基序列进行详细比较发现，3'端的多个残基存在系统差异，野生型ρ更喜欢富含腺嘌呤的序列，而突变型ρ则相反。发现被避开了。因此，新近提出ρ可能将RNA链3'最末端的序列识别为终止信号。 3. ρ蛋白的功能域组织——ρ蛋白的一级结构和二级结构是当。与ATP酶相比，在ρ蛋白的中央约200个残基中发现了共同点，并且推测该区域构成了负责ATP酶活性的功能结构域，在上述突变位点中，有156个。 304、结果发现，残基323与ATPase结构域直接或间接相关，而残基3属于另一个结构域。从上述结果中，ρ因子与RNA的相互作用模式以及ρ功能域结构得到了重要线索。基于这些发现，我们希望进一步研究 ρ 因子作用的分子机制。