温度ジャンプNMRによるタンパク質フォールディング研究の新展開

利用温跃核磁共振研究蛋白质折叠的新进展

基本信息

批准号：
00J04867
负责人：
川上勝
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J04867/
关键词：
タンパク質フォールディングマイクロ波温度ジャンプ

项目摘要

前年度までにマイクロ波温度ジャンプNMR装置の開発は終了している。14年度の研究では、タンパク質の低温変性状態から天然状態へのフォールディング過程を追跡するため、NMRプローブ内において安定した低温状態を長時間実現させる装置の開発を新たに進め、これを完成させた。これらの装置を用い、βラクトグロブリンの低温変性状態からの温度ジャンプNMRスペクトル、そして低温変性状態-天然状態間の状態相関2次元NMRスペクトルを測定することに成功し、フォールディング過程をNMRという原子レベルにおいて追跡する事に成功し、さらに変性状態そのものの構造の知見についても得ることが可能となった。さらに、この低温変性状態-天然状態へのフォールディング過程を、NMRだけでなく、他の分光法においても測定し、お互いに相補的な情報を得る事でさらにこの過程を詳細に調べることを目指し、温度ジャンプCD(円偏光2色性)、温度ジャンプ蛍光法を開発した。そして実際に温度ジャンプNMRと全く同じ時間スケールでフォールディングを追跡することに成功した。これによりより現在これらの結果をまとめた論文を投稿準備中である。その一方で、新たに測定装置、特にタンパク質フォールディング測定における新装置開発の手腕を磨くべく、研究代表者はフォールディング研究の分野で高名なSheena Radford教授(LEEDS大学、英国)の元へ行き、装置開発のノウハウを教わり、イギリスでのフォールディング研究に関する学会に積極的に参加し、本分野の現状、発展性についての学識、知見を広めた。

微波温度跳跃NMR设备的开发已经完成。在2014财年的研究中，为了跟踪从低温模式的蛋白质状态到自然状态的折叠过程，在NMR探针中很长一段时间内实现了稳定的低温度状态的设备的开发已被新促进，这已经完成。使用这些设备，它成功地测量了β-乳球蛋白的低温模式的温度跳跃NMR光谱，并且状态相关性2D光谱在低温模式 - 自然状态之间，折叠过程是NMR成功，并且有可能了解修改状态本身的结构。此外，低温模式 - 自然状态的折叠过程不仅在NMR中，而且在其他光谱法中测量，其目的是通过从彼此获得互补信息（循环跳跃CD）（通过获得互补信息）进一步检查这一过程。偏振2颜色）和温度跳跃荧光法。实际上，他成功地跟踪了与温度跳跃NMR相同的时间尺度折叠。结果，我们目前正在准备一篇汇总这些结果的论文。另一方面，为了在新的测量设备中提高新设备开发的技能，尤其是在蛋白质折叠测量中，研究代表去了Sheena Radford教授（英国利兹大学），该研究在折叠领域很有名研究。