温度ジャンプNMRによるタンパク質フォールディング研究の新展開

利用温跃核磁共振研究蛋白质折叠的新进展

基本信息

批准号：
00J04867
负责人：
川上勝
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J04867/
关键词：
タンパク質フォールディングマイクロ波温度ジャンプ

项目摘要

前年度までにマイクロ波温度ジャンプNMR装置の開発は終了している。14年度の研究では、タンパク質の低温変性状態から天然状態へのフォールディング過程を追跡するため、NMRプローブ内において安定した低温状態を長時間実現させる装置の開発を新たに進め、これを完成させた。これらの装置を用い、βラクトグロブリンの低温変性状態からの温度ジャンプNMRスペクトル、そして低温変性状態-天然状態間の状態相関2次元NMRスペクトルを測定することに成功し、フォールディング過程をNMRという原子レベルにおいて追跡する事に成功し、さらに変性状態そのものの構造の知見についても得ることが可能となった。さらに、この低温変性状態-天然状態へのフォールディング過程を、NMRだけでなく、他の分光法においても測定し、お互いに相補的な情報を得る事でさらにこの過程を詳細に調べることを目指し、温度ジャンプCD(円偏光2色性)、温度ジャンプ蛍光法を開発した。そして実際に温度ジャンプNMRと全く同じ時間スケールでフォールディングを追跡することに成功した。これによりより現在これらの結果をまとめた論文を投稿準備中である。その一方で、新たに測定装置、特にタンパク質フォールディング測定における新装置開発の手腕を磨くべく、研究代表者はフォールディング研究の分野で高名なSheena Radford教授(LEEDS大学、英国)の元へ行き、装置開発のノウハウを教わり、イギリスでのフォールディング研究に関する学会に積極的に参加し、本分野の現状、発展性についての学識、知見を広めた。

微波温度跃升NMR设备的开发已经结束。在2014年的研究中，我们完成了一种新的开发，该设备可以长时间在NMR探针内实现稳定的低温状态，以跟踪从低温贬低状态到自然状态的蛋白质折叠过程。使用这些设备，我们已经成功地测量了从低温定性状态的β-乳球蛋白的贬低状态的温度跳跃NMR光谱，以及状态相关性的2D NMR光谱之间的低温定性状态与自然状态，自然状态，并成功地跟踪了NMR的折叠层，也已成为NMR的折叠过程，并已成为NMR的折叠过程，并且已经成为可能获得的结构。此外，我们已经开发了温度跳跃CD（圆形二色性）和温度跳跃荧光方法，旨在通过不仅通过NMR，而且通过其他光谱法测量此过程，并彼此获得互补信息，从而进一步研究此过程。实际上，我们设法在与温度跳跃NMR完全相同的时间尺度上跟踪折叠。结果，我们目前正在准备提交一篇汇总这些结果的论文。另一方面，为了磨练开发新的测量设备，尤其是蛋白质折叠测量的技能，研究人员求助于Sheena Radford教授（英国利兹大学），他在折叠研究领域是众所周知的，在那里他了解了设备开发的知识，并积极地参与了对英国的折叠研究，以了解他的知识和知识的知识和发展，并跨越了他的知识和发展。