酵母を用いた中枢神経系における転写因子新遺伝子クローニングシステムの開発

使用酵母开发中枢神经系统转录因子的新基因克隆系统

• 批准号: 11877230
• 负责人: 多田 光宏
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877230/
• 关键词: Yeast-based Genetic Diagnosis; Cloning of New Genes; Transcriptional Factor; Luciferase Assay; ADE2 gene; Central Nervous System; Cloning of new Genes

本研究計画では、酵母(S.cerevisiae)内にて、広く哺乳動物の転写因子活性化能の定量を可能とするシステム(yeast-based luciferase assay;以下YLAと略)の構築を目的とする。それにより、転写因子の制御因子を単一あるいは複数個同時発現して制御システムを酵母内に再構築して検討を可能とする。本年度は以下の成果を得た.1)p53 responsive element(p21,Bax)を含むプロモータ駆動をFirefly luciferaseをリポーターとして測定するシステムを完成,Renilla luciferase(内部標準)とともにp53,p73,p63によるプロモーター活性化の測定に成功した.2)p53の変異体80種の転写活性化能を測定し,変異体は必ずしも全ての転写活性を失っているわけではないことを見いだした(投稿準備中).3)p53に相互作用し,転写活性を上昇させるc-Abl,p33ING1,ING2を同時導入し,それらによる転写活性の上昇を確認した.4)Tcf-4/β-cateninの転写活性を測定するアッセイも同様に確立し,APCを同時導入して転写活性が抑制されることを確認した(投稿準備中).さらに本年度中にp53,p73,p63遺伝子またはTcf-4/β-cateninとともにcDNA libraryをADE2またはFirefly luciferaseのリポーター酵母株に導入し,これらの転写活性を調節する新しい遺伝子のクローニングをモデル実験として行う予定である.

本研究项目的目的是构建一个系统（基于酵母的荧光素酶测定；以下缩写为YLA），该系统能够量化酵母（酿酒酵母）中多种哺乳动物转录因子的激活能力。这使得通过同时表达单个或多个转录因子调节因子来重建和研究酵母中的控制系统成为可能。今年，我们获得了以下成果： 1) 使用 Firefly 荧光素酶作为报告基因 Renilla，完成了测量启动子驱动的系统，包括 p53 响应元件（p21、Bax）我们成功测量了p53、p73和p63与荧光素酶（内标）的启动子激活。2）我们测量了80个p53突变体的转录激活能力，发现突变体并不一定失去所有转录活性（准备提交。 ).3) c-Abl、p33ING，与 p53 相互作用并增加转录活性。 1.我们共同引入了ING2并证实了转录活性的增加4）我们还建立了一种检测Tcf-4/β-catenin转录活性的方法，并共同引入了APC来抑制转录活性（准备提交。 ）。此外，今年内，cDNA 以及 p53、p73、p63 基因或 Tcf-4/β-catenin我们计划将该文库引入 ADE2 或 Firefly 荧光素酶报告酵母菌株中，并克隆调节这些转录活性的新基因作为模型实验。

项目成果

Marutani, M.,Tada, M., et al.: "Dominant-negative mutations of the tumor suppressor p53 relating to early onset of glioblastoma multiforme"Cancer Research. 59. 4765-4769 (1999)

Marutani, M.、Tada, M. 等人：“与多形性胶质母细胞瘤早期发病相关的肿瘤抑制因子 p53 的显性阴性突变”癌症研究。

Asaoka, K.,Tada, M., et al.: "Efficient adenoviral gene delivery in malignant glioma cells depends on the expression levels of coxsackievirus and adenovirus receptor"Journal of Neurosurgery (in press). 未定(in press). (2000)

Asaoka, K., Tada, M.等人：“恶性神经胶质瘤细胞中腺病毒基因的有效传递取决于柯萨奇病毒和腺病毒受体的表达水平”《神经外科杂志》（待定）（待定）。 (2000)

Zhang C-L, Tada M, et al.: "Detection of PTEN nonsense mutation and psiPTEN expression in central nervous system high-grade astrocytic tumors by a yeast-based stop codon assay."Oncogene. 19. 4346-4353 (2000)

张 C-L、Tada M 等人：“通过基于酵母的终止密码子测定检测中枢神经系统高级星形细胞肿瘤中的 PTEN 无义突变和 psiPTEN 表达。”癌基因。

Nozaki, M.,Tada, M. et al.: "Roles of the functional loss of p53 and other genes in astrocytoma tumorigenesis and progression"Neuro-Oncology. 1. 149-162 (1999)

Nozaki, M., Tada, M. 等人：“p53 和其他基因功能丧失在星形细胞瘤发生和进展中的作用”神经肿瘤学。