新規カルモデュリン拮抗薬の抗アポトーシス作用の神経薬理学的研究

新型钙调蛋白拮抗剂抗细胞凋亡作用的神经药理学研究

基本信息

批准号：
11877018
负责人：
福永浩司
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

新規カルモデュリン拮抗薬であるDY-9760eはin vitroにおいて種々のカルモデュリン依存性酵素を阻害する。白崎ら(第一製薬)はラット中大脳動脈閉塞モデルにおいて虚血に伴う神経細胞死を有意に抑制することを報告した。本研究では新たな作用機構を有する新規脳保護薬、DY-9760eのin vivoにおける作用点を明らかにすることである。マウス神経芽腫細胞N1E-115細胞においてカルシウムイオノフォア、A23187によって誘発されるNO産生に対する効果を検討した。1μM以下の濃度で有意にNOの産生を抑制した。このNO産生抑制効果と同じ濃度でDY-9760eはA23187によるN1E-115細胞からのLDH(lactate dehydrogenase)の遊離を抑制し、細胞保護効果を示した。さらに、砂ネズミの前脳虚血モデルを用いて神経保護作用と、虚血による海馬でのNO産生に対する効果を検討した。ラット中大脳動脈閉塞モデルと同様に虚血負荷による遅発性神経細胞死をDY-9760eは有意に抑制した。また、マイクロダイアリシス法で海馬内のNO濃度を測定すると、虚血直後、海馬でNO濃度が有意に上昇することが解った。このNO濃度上昇に対してDY-9760eは抑制した。これらのin vitroとin vivoの結果からDY-9760eはカルモデュリン依存性NOSを阻害することによって神経保護作用を示すことが明らかとなった。さらに、神経型、内皮細胞型NOSに対する選択性について検討する必要がある。

DY-9760e 是一种新型钙调蛋白拮抗剂，可在体外抑制多种钙调蛋白依赖性酶。 Shirasaki 等人（第一制药）报道，它在大鼠大脑中动脉闭塞模型中显着抑制缺血引起的神经元死亡。本研究的目的是阐明具有新作用机制的新型神经保护药物DY-9760e的体内作用位点。我们研究了钙离子载体 A23187 对小鼠神经母细胞瘤 N1E-115 细胞诱导的 NO 产生的影响。 NO 的产生在浓度低于 1 μM 时受到显着抑制。在与这种 NO 产生抑制作用相同的浓度下，DY-9760e 抑制 A23187 诱导的 N1E-115 细胞中 LDH（乳酸脱氢酶）的释放，并表现出细胞保护作用。此外，我们使用沙鼠前脑缺血模型研究了神经保护作用以及缺血对海马 NO 产生的影响。与大鼠大脑中动脉闭塞模型类似，DY-9760e显着抑制缺血应激引起的迟发性神经元细胞死亡。此外，当使用微透析测量海马中的NO浓度时，发现缺血后海马中的NO浓度显着增加。 DY-9760e 抑制了 NO 浓度的增加。这些体外和体内结果表明，DY-9760e 通过抑制钙调蛋白依赖性 NOS 发挥神经保护作用。此外，有必要检查神经元和内皮细胞型 NOS 的选择性。