HIV潜伏感染と再活性化におけるヒストンアセチル化制御の役割に関する

组蛋白乙酰化调节在HIV潜伏感染和再激活中的作用

基本信息

批准号：
11161204
负责人：
渡邉俊樹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161204/
关键词：
HIV CpGメチル化 LPS TNF-α Dnmt1 ヒストンアセチル化

项目摘要

HIVの潜伏感染と再活性化におけるメチル化CpGとヒストンアセチル化制御の意義を検討した結果、以下の様な点を明らかにした。1)transient transfection系において、in vitroでSssI methylaseによってCpGをメチル化されたHIV LTRは基礎転写活性のみならずTNF-αなどの活性化刺激に対する反応性が著しい低下を示した。2)HIV慢性感染細胞株を用いた解析で、ウイルス遺伝子発現のレベルがLTR U3領域のCpGメチル化の程度と相関した。3)慢性感染細胞株をTNF-αで処理してウイルス遺伝子発現誘導すると、U3領域のCpG脱メチル化が認められた。4)HIV transgenic mouseでの各臓器におけるウイルス遺伝子発現レベルとLTR U3領域のCpG siteメチル化レベルが相関した。5)LPS処理による脾臓細胞でのウイルス遺伝子発現誘導に伴いU3領域の一ケ所のCpG site(CREB/AP-l motif内)で特異的に脱メチル化が進行した。6)LPSやTNF-αによる潜伏ウイルスの発現誘導には細胞周期の進行=DNA合成を必要とした。7)HIV慢性感染細胞において、TNF-α等の刺激によりH3,H4ヒストンのアセチル化が誘導されることを染色体免疫沈降法(ChIP)で示した。以上の結果は、HIVの潜伏感染成立におけるCpGメチル化の重要性を示すと共に、再活性化刺激が脱メチル化を誘導すること、その際にDNA合成を必要とすることから、その作用点はメチル化維持酵素Dnmtlの機能阻害であることを示している。また、再活性化に伴い、特定のCpGの脱メチル化が進行することは、全く新たな知見である。その部位がCREB/AP-l motifにあることは、再活性化にはp38MAPKの関与を示唆する結果である。

通过研究甲基化 CpG 和组蛋白乙酰化控制在 HIV 潜伏感染和再激活中的重要性，我们澄清了以下几点。 1) 在瞬时转染系统中，体外 CpG 被 SssI 甲基化酶甲基化的 HIV LTR 不仅基础转录活性显着降低，而且对 TNF-α 等激活刺激的反应性也显着降低。 2）使用HIV慢性感染细胞系进行的分析表明，病毒基因表达水平与LTR U3区域的CpG甲基化程度相关。 3）当用TNF-α处理慢性感染的细胞系以诱导病毒基因表达时，观察到U3区的CpG去甲基化。 4) HIV转基因小鼠各器官的病毒基因表达水平与LTR U3区CpG位点甲基化水平相关。 5)当通过LPS处理在脾细胞中诱导病毒基因表达时，去甲基化在U3区的一个CpG位点(CREB/AP-1基序内)特异性地进行。 6) LPS 和 TNF-α 诱导潜伏病毒表达所需的细胞周期进程 = DNA 合成。 7) 我们通过染色体免疫沉淀 (ChIP) 表明，在慢性感染 HIV 的细胞中，H3 和 H4 组蛋白的乙酰化是由 TNF-α 等刺激诱导的。上述结果证明了CpG甲基化在HIV潜伏感染建立中的重要性，作用点在于重新激活刺激诱导去甲基化，这需要DNA合成，这表明它抑制甲基化维持酶Dnmtl的功能。此外，这是一个全新的发现，特定 CpG 的去甲基化随着重新激活而进行。该位点位于 CREB/AP-1 基序中的事实表明 p38 MAPK 参与再激活。