Islet-3の下流で中脳・小脳形成を制御する因子の機能解析

Islet-3下游控制中脑和小脑形成的因素的功能分析

• 批准号: 11152239
• 负责人: 三枝 理博
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11152239/
• 关键词: ten-m3; ten-m4; transpondin; LIM; homeodomain; Islet-3; セブラフィッシュ

LIM/homeodomain型転写因子の一つ、Islet-3のドミナントネガティブ変異体(DN)をゼブラフィッシュ胚において過剰発現すると、中脳後脳境界部(小脳原基)の形成が阻害される。そこで我々は、Islet-3 DN過剰発現により発現が減少する遺伝子を探索し、中脳後脳境界部形成に重要な分子を網羅的に同定することを試みた。現在、中脳後脳境界部などに発現するクローンが少なくとも8つ得られている。クローン#106は、ショウジョウバエのペア・ルール遺伝子ten-m/odd Oz(odz)相同遺伝子で、2590アミノ酸からなり八つのEGFモチーフを持つ膜蛋白質をコードしていた(ten-m3)。もう一つゼブラフィッシュten-m相同遺伝子が得られたが(ten-m4)、ten-m3、ten-m4はゼブラフィッシュ胚の中枢神経系の様々な場所で、相補的な発現パターンを示した。クローン#533は317アミノ酸からなる蛋白質をコードする新規遺伝子で、N末半分にfurin-like cystein-rich region、C末の近くにthrombospondin type I repeat(TSR)と核移行シグナル(NLS)を持つ。中脳後脳境界部背側部、終脳背側部、終脳間脳境界部等に発現し、Islet-3 DN過剰発現胚では中脳後脳境界部での発現が誘導されない。また、533蛋白質は細胞膜近傍と細胞核に局在すること、転写を調節し終脳の分化を制御することが示唆された。thrombospondin repeatを持ち、細胞膜近傍と核との間で局在が制御され(translocation)、転写(transcription)に関わっていることから、この蛋白質をtranspondinと命名した。さらに、マウス相同遺伝子のクローニング、ヒトESTデータベースの検索により、transpondinは少なくとも脊椎動物で広く保存されている新しい遺伝子ファミリーを形成していることが示唆された。

Islet-3（一种 LIM/同源域型转录因子）的显性失活突变体 (DN) 在斑马鱼胚胎中的过度表达会抑制中脑-后脑边界（小脑原基）的形成。因此，我们寻找因Islet-3 DN过表达而表达降低的基因，并试图全面鉴定对中脑-后脑边界形成重要的分子。目前，至少已获得8个在中脑-后脑边界表达该基因的克隆。克隆#106是果蝇配对规则基因10-m/奇奥兹(odz)同源基因，其编码由2590个氨基酸组成并具有8个EGF基序(ten-m3)的膜蛋白。获得了另一个斑马鱼ten-m同源基因（ten-m4），ten-m3和ten-m4在斑马鱼胚胎中枢神经系统的各个位置表现出互补的表达模式。克隆 #533 是一种新基因，编码由 317 个氨基酸组成的蛋白质，其 N 端半部具有弗林蛋白酶样半胱氨酸丰富区域，并且靠近 N 端有血小板反应蛋白 I 型重复序列 (TSR) 和核定位信号 (NLS)。 C-末端。它表达于中脑-后脑边界的背侧部分、端脑背侧部分、端脑间脑边界等，并且在过表达Islet-3 DN的胚胎中不诱导其在中脑-后脑边界的表达。此外，有人认为533蛋白位于细胞膜附近和细胞核中，并且它调节转录并控制端脑分化。这种蛋白质被命名为转反应蛋白，因为它具有血小板反应蛋白重复序列​​，其定位控制在细胞膜和细胞核之间（易位），并且参与转录。此外，小鼠同源基因的克隆和人类EST数据库的搜索表明转座蛋白形成了一个新的基因家族，该家族至少在脊椎动物中广泛保守。