無細胞系を用いた色素性乾皮症C群蛋白質複合体(XPC-hHR23B)の機能解析

使用无细胞系统对着色性干皮病 C 组蛋白复合物 (XPC-hHR23B) 进行功能分析

基本信息

批准号：
11138234
负责人：
益谷央豪
金额：
$ 2.88万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

高発癌性遺伝病である色素性乾皮症(XP)は、AからGおよびバリアント(V)の8つの遺伝的相補性群に分類される。XP-AからG群では、ヌクレオチド除去修復機構が欠損しており、DNA損傷の修復が行なわれない。我々が単離したXPC-hHR23B複合体は、DNA損傷の認識に関与する。本研究により、XPC-hHR23B複合体は、主要な紫外線損傷のひとつである(6-4)光産物を認識して結合するが、最も主要な紫外線損傷であるシクロブタン型ピリミジンダイマー(CPD)に対する選択的な結合は観察されないこと、また、これらの損傷の修復効率はXPC複合体の結合しやすさと良い相関が見られることを示した。さらに、XPC複合体の損傷DNA結合により、XPBとXPDを含むTFIIHが損傷DNA上に導入されることを明らかにした。一方、XP-V群は、ヌクレオチド除去修復機構は正常であり、その欠損機構は明らかでなかった。XP患者における発がんの機構を総合的に理解するためには、XP-V群の欠損機構を明らかにし、XPV責任遺伝子を同定することが必須である。本研究では、試験管内DNA複製系を用いて、XP-V群の細胞抽出液では、CPDを含む鋳型DNAの複製反応に欠損があることを明らかにした。さらに、その欠損を相補する蛋白質を精製し、これがCPDを乗り越えてDNA合成を行なえる新規のDNAポリメラーゼηであることを明らかにした。

高度致癌的遗传疾病（XP）分为八个遗传互补群：A至G和变体（V）。在XP-A到G组中，缺少核苷酸切除修复机制，并且未修复DNA损伤。我们分离的XPC-HHR23B复合物参与识别DNA损伤。这项研究表明，XPC-HHR23B复合物识别并结合了主要的紫外线损伤之一（6-4），但选择性结合与环丁烷型嘧啶二聚体（CPD），这是最重要的紫外线损伤，这是最大的紫外线损伤，并未观察到这些损害的修复效率，这些损害的修复效率与XPC的质量相结合依赖于XPC的效果。此外，揭示了XPC复合物的DNA结合受损的DNA结合将包括XPB和XPD在内的TFIIH引入受损的DNA上。另一方面，XP-V组具有正常的核苷酸切除修复机制，并且缺陷机制尚不清楚。为了全面了解XP患者的致癌作用机制，必须阐明XP-V组缺乏机制并确定负责任的XPV基因。在这项研究中，使用体外DNA复制系统，我们揭示了来自XP-V组的细胞提取物在含有CPD的模板DNA的复制响应中存在缺陷。此外，纯化了与缺陷的蛋白质互补的蛋白质，并表明这是一种新型的DNA聚合酶η，可以克服CPD并执行DNA合成。