無細胞系を用いた色素性乾皮症C群蛋白質複合体(XPC-hHR23B)の機能解析

使用无细胞系统对着色性干皮病 C 组蛋白复合物 (XPC-hHR23B) 进行功能分析

基本信息

批准号：
11138234
负责人：
益谷央豪
金额：
$ 2.88万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

高発癌性遺伝病である色素性乾皮症(XP)は、AからGおよびバリアント(V)の8つの遺伝的相補性群に分類される。XP-AからG群では、ヌクレオチド除去修復機構が欠損しており、DNA損傷の修復が行なわれない。我々が単離したXPC-hHR23B複合体は、DNA損傷の認識に関与する。本研究により、XPC-hHR23B複合体は、主要な紫外線損傷のひとつである(6-4)光産物を認識して結合するが、最も主要な紫外線損傷であるシクロブタン型ピリミジンダイマー(CPD)に対する選択的な結合は観察されないこと、また、これらの損傷の修復効率はXPC複合体の結合しやすさと良い相関が見られることを示した。さらに、XPC複合体の損傷DNA結合により、XPBとXPDを含むTFIIHが損傷DNA上に導入されることを明らかにした。一方、XP-V群は、ヌクレオチド除去修復機構は正常であり、その欠損機構は明らかでなかった。XP患者における発がんの機構を総合的に理解するためには、XP-V群の欠損機構を明らかにし、XPV責任遺伝子を同定することが必須である。本研究では、試験管内DNA複製系を用いて、XP-V群の細胞抽出液では、CPDを含む鋳型DNAの複製反応に欠損があることを明らかにした。さらに、その欠損を相補する蛋白質を精製し、これがCPDを乗り越えてDNA合成を行なえる新規のDNAポリメラーゼηであることを明らかにした。

着色性干皮病 (XP) 是一种高度致癌的遗传病，分为八个遗传互补组：A 至 G 和变体 (V)。 XP-A至G组缺乏核苷酸切除修复机制，不能修复DNA损伤。我们分离的 XPC-hHR23B 复合物参与 DNA 损伤识别。本研究表明，XPC-hHR23B 复合物可识别并结合光产物，这是紫外线损伤的主要类型之一 (6-4)，并且对环丁烷型嘧啶二聚体 (CPD) 有选择性，这是最主要的类型我们发现没有观察到结合，并且修复这些损伤的效率与 XPC 复合物结合的容易程度密切相关。此外，我们还发现，通过 XPC 复合物与受损 DNA 的结合，将含有 XPB 和 XPD 的 TFIIH 引入到受损 DNA 上。另一方面，在XP-V组中，核苷酸切除修复机制正常，缺陷机制尚不清楚。为了全面了解XP患者的致癌机制，有必要阐明XP-V组的缺陷机制并鉴定导致XPV的基因。在这项研究中，我们使用体外 DNA 复制系统，发现 XP-V 组的细胞提取物在含有 CPD 的模板 DNA 的复制反应中存在缺陷。此外，他们纯化了一种蛋白质来补充这一缺陷，并揭示它是一种新型DNA聚合酶η，可以克服CPD并进行DNA合成。