X線精密構造解析のためのリボソームの結晶化

用于 X 射线精密结构分析的核糖体结晶

• 批准号: 10878109
• 负责人: 田中 勲
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878109/
• 关键词: リボソーム; X線解析; リボソーム; X線解析

リボソームはmRNAの塩基配列に従ってポリペプチド鎖を正確に伸長し,タンパク質を合成する細胞内小器官である.しばしば,蛋白質合成工場に例えられる通り,遺伝暗号解読,ペプチジルトランスファー,トランスロケーション,分子的な校正など,生命にとって極めて重要でかつ複雑な仕事を整然と行なっており,その構造が決定された場合の生物科学全体に与えるインパクトは計り知れないものがある.本研究では,リボソームの原子レベルでの立体構造解析を行なうための,高分解能のX線回折を与える結晶を調製することを目的とした.このため,好気性の超好熱古細菌Aeropyrum pernix(至適生育温度90度)嫌気性の超好熱古細菌Pyrococcus horikoshii(至適生育温度98度),高度好熱真性細菌Rhodothermus obamensis,からリボソームを調製することを試みた.超遠心分離法,疎水性クロマトグラフィー,ショ糖連続密度勾配遠心法を用いて,70Sリボソーム,各サブユニットの調製方法を確立した.また,超遠心分離で粗精製した70Sリボソームは,さらに疎水クロマトグラフィーを用いることで,より純度高く精製することができることを確認した.すべてのリボソームサンプルについて,蛋白質合成活性を調べ,高温(70度)において活性があることを確認した.今後は,さらに結晶化条件の検討を行いX線構造解析に持ち込むことを計画している.

核糖体是细胞内细胞器，根据mRNA和合成蛋白质的碱基序列准确延伸多肽链。通常，作为蛋白质合成工厂，它们对生命执行了极其重要且复杂的任务，例如遗传密码解密，肽基转移，易位和分子校准，以及当确定其结构的确定时，可以对整个生物科学产生的影响。这项研究旨在制备为核糖体原子水平提供高分辨率X射线衍射的晶体。因此，有氧性高疗细胞古细胞疗中心（最佳生长温度为90度），厌氧高热粒细胞古细菌pyrocococcus horikoshii（最佳生长温度98度），以及高度嗜热的古细菌旋律，我们试图从Obesmesis中培养核糖体。我们已经建立了一种使用超速离心，疏水色谱和蔗糖连续密度梯度离心的方法来制备70S核糖体和每个亚基。我们还确认，通过使用疏水色谱法将70S核糖体通过超速离心纯化为更高的纯度。研究了所有核糖体的蛋白质合成活性，并确认它们在高温（70度）下活跃。我们计划进一步研究结晶条件，并将它们带入X射线结构分析。