加齢に伴うテロメアDNAの短小化を利用した、法医学領域での年齢推定

利用端粒 DNA 随着衰老而缩短的法医学领域年龄估计

• 批准号: 10877076
• 负责人: 斎藤 久子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877076/
• 关键词: ヒトテロメアDNA; テロメア; テロメア長; 年齢推定; 法医学; DNA

テロメアDNAとは、反復配列で構成されている染色体末端構造のことで、ヒトテロメアDNAでは、TTAGGGの反復配列がテロメア側にその3'末端が向かうように、数Kbから約20Kbにわたって存在する。このテロメアDNAの長さ、つまりテロメア長が加齢に伴い短小化していくことを、法医学領域での年齢推定に応用できるのではないかと検討中である。健康人41人(20〜60代)の末梢血から、フェノール・クロロホルム抽出とエタノール沈殿により、高分子量・高純度のDNAを抽出した。これらのDNAのうち9サンプルを用いて、ランダムプライマー法により蛍光標識された(TTAGGG)25プローブによるサザンハイブリダイゼーションを行い、アルカリホスファターゼと化学発光試薬CDP-Star^<TM>の組み合わせ(核酸ラベリングキット、ナイロンメンブラン、検出試薬ともに第一化学薬品)により検出しテロメア長を測定した。しかし、上記の方法では、加齢とテロメア長短小化との明らかな関係は得られなかった。今回用いたDNAの年齢層には偏りがあるため、20歳以下と60代以降の年齢層のDNAを集め、さらに、プローブの配列、蛍光物質以外の標識法などを再検討していく予定である。また、法医学領域では陳旧、微量なサンプルが多いため、抽出したDNAが断片化されていることが考えられる。したがって、低分子量のDNAを用いても検出可能で、より簡便なテロメア長測定法を開発していきたいと考えている。

端粒DNA是位于染色体末端的由重复序列组成的结构，在人类端粒DNA中，TTAGGG重复序列从几Kb延伸至约20Kb，其3'端面向端粒一侧。我们目前正在研究将端粒 DNA 的长度或端粒长度随年龄减小这一事实应用于法医学领域估计年龄的可能性。通过苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀从41名健康人（20岁至60岁）的外周血中提取高分子量、高纯度的DNA。使用随机引物法、尼龙膜和检测试剂（均为第一化学）使用荧光标记（TTAGGG）25 探针对其中 9 个 DNA 样品进行 Southern 杂交，以测量端粒长度。然而，上述方法并没有揭示衰老与端粒缩短和缩短之间的明确关系。由于这次使用的DNA的年龄组存在偏差，因此我们计划收集20岁以下人群和60多岁以上人群的DNA，然后重新考虑荧光物质以外的探针序列和标记方法。另外，在法医学领域，许多样本年代久远且含量极少，因此提取的DNA有可能是碎片化的。因此，我们希望开发一种更简单的方法来测量端粒长度，甚至可以使用低分子量 DNA 进行检测。