加齢に伴うテロメアDNAの短小化を利用した、法医学領域での年齢推定

利用端粒 DNA 随着衰老而缩短的法医学领域年龄估计

• 批准号: 10877076
• 负责人: 斎藤 久子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877076/
• 关键词: ヒトテロメアDNA; テロメア; テロメア長; 年齢推定; 法医学; DNA

テロメアDNAとは、反復配列で構成されている染色体末端構造のことで、ヒトテロメアDNAでは、TTAGGGの反復配列がテロメア側にその3'末端が向かうように、数Kbから約20Kbにわたって存在する。このテロメアDNAの長さ、つまりテロメア長が加齢に伴い短小化していくことを、法医学領域での年齢推定に応用できるのではないかと検討中である。健康人41人(20〜60代)の末梢血から、フェノール・クロロホルム抽出とエタノール沈殿により、高分子量・高純度のDNAを抽出した。これらのDNAのうち9サンプルを用いて、ランダムプライマー法により蛍光標識された(TTAGGG)25プローブによるサザンハイブリダイゼーションを行い、アルカリホスファターゼと化学発光試薬CDP-Star^<TM>の組み合わせ(核酸ラベリングキット、ナイロンメンブラン、検出試薬ともに第一化学薬品)により検出しテロメア長を測定した。しかし、上記の方法では、加齢とテロメア長短小化との明らかな関係は得られなかった。今回用いたDNAの年齢層には偏りがあるため、20歳以下と60代以降の年齢層のDNAを集め、さらに、プローブの配列、蛍光物質以外の標識法などを再検討していく予定である。また、法医学領域では陳旧、微量なサンプルが多いため、抽出したDNAが断片化されていることが考えられる。したがって、低分子量のDNAを用いても検出可能で、より簡便なテロメア長測定法を開発していきたいと考えている。

端粒DNA是由重复序列组成的染色体末端结构，在人端粒DNA中，Ttaggg的重复序列从几个Kb到约20 kb存在，因此其3'端针对端粒侧。我们目前正在考虑端粒DNA的长度（即端粒长度）是否可以随着年龄的增加而降低。通过提取苯酚 - 氯仿和乙醇沉淀，从41位健康人的外周血（20至60年代）中提取高分子量和高纯度DNA。使用这些DNA样品中的九个使用随机引物方法使用荧光标记（TTAGGG）25探针进行南部杂交，并通过碱发光磷酸酶和化学发光的化学试剂CDP-Star^<tm>的组合来测量端粒长度。但是，上述方法没有在衰老和端粒长度和缩短之间提供明确的关系。由于这段时间使用了DNA的年龄范围，我们计划从20岁及以上及以上的DNA中收集DNA，并重新检查探针序列和标记方法以外的荧光物质。此外，由于法医领域中有许多旧样品和小样品，因此提取的DNA可能是碎片的。因此，我们想开发一种更方便的方法来测量端粒长度，即使使用低分子量DNA也可以检测到。