キャピラリー電気泳動-加熱気化ICP-MSによる化学形態別超微量分析法の開発

毛细管电泳-热汽化ICP-MS不同化学形态超痕量分析方法的开发

基本信息

批准号：
10874111
负责人：
熊丸尚宏
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

キャピラリー電気泳動(CE)分析法は優れた分離能を有するが、分析に用いる試料の導入量が極めて微少であるため、微量検出に問題が生じる。一方、ICP質量分析法をはじめとして、原子スペクトル分析法は、高感度であり超微量レベルの測定が可能である反面、形態別分析は不可能である。そこで本研究では、CEと原子スペクトル分析装置とを相補的に組み合わせる、超高感度形態別分析法を着想した。試料の例として、本研究では生体関連化合物のシアノコバラミンとメチルコバラミンを用いた。両者は共に原子スペクトル分析法で高感度に測定できるコバルトを含み、かつ強いUV吸収も示すので、CEでは汎用のUV検出が併用でき、基礎研究に好適であった。検出法としては黒鉛炉原子吸光法を利用した。まず、CE装置とフラクションコレクターのオンライン接続を試みた。CEの泳動液にはリン酸塩緩衝溶液を用いた。試料溶液は陽極側から導入した。電気泳動により移動した目的成分はキャピラリーの陰極側の端から流出させ、その流出液をフラクションコレクターによって分取した。その際、キャピラリーから流出する液量は極めて少ないので、シリンジポンプからも同じリン酸塩緩衝溶液を送液して補った。分取した各フラクションをオートサンプラーにより黒鉛炉原子吸光装置へ導入し、試料中のコバルト成分を検出した。その際、シリンジポンプによる流速を増すとキャピラリーから流出した両成分が拡散され、検出感度が低下した。一方、その流速を下げると感度は向上するが両者のピークが重なり、両成分の分離が損なわれた。それらを最適化した条件下において、シアノコバラミンとメチルコバラミンが分離して観測された各々の原子吸光度のピーク高さから検量線を作成したところ、きわめて良好な直線性が得られた。

毛细管电泳（CE）分析方法具有出色的分离能力，但是用于分析的样品的量极小，导致检测痕量量的问题。另一方面，包括ICP质谱在内的原子光谱分析方法具有很高的敏感性，并且可以进行超迹线的测量水平，但对于形态学分析是不可能的。因此，在这项研究中，我们构思了一种超敏感的形态分析方法，该方法以互补方式结合了CE和原子光谱分析仪。作为样品的示例，本研究使用了与生物学相关的化合物氰cal素和甲基钴胺素。两者都包含钴，可以使用原子光谱分析以高灵敏度测量，并且还表现出强烈的紫外线吸收，因此可以在CE中使用通用紫外线检测，使其适合基础研究。石墨炉原子吸收光谱法被用作检测方法。首先，我们试图在线连接CE设备和分数收集器。磷酸盐缓冲溶液用作CE迁移溶液。从阳极侧引入样品溶液。通过电泳传递的目标成分从毛细管的阴极末端排出，并由分数收集器分离。目前，从毛细管中流出的液体量非常小，因此还从注射泵中喂食相同的磷酸盐缓冲溶液以补偿。使用自动采样器将分离的每个分数都引入石墨炉原子吸收装置中，以检测样品中的钴成分。目前，当增加注射器泵的流速时，将两个从毛细管流出的组件扩散，从而降低了检测灵敏度。另一方面，降低流速会提高灵敏度，但两个重叠的峰会损害了两个组分的分离。在这些条件下，通过分离氰钴胺和甲基callamin观察到的原子吸光度的峰高度制备了校准曲线，并获得了极好的线性性。