HIV-1アッセンブリ阻害分子の開発

HIV-1组装抑制剂分子的开发

• 批准号: 10180236
• 负责人: 松田 善衛
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10180236/
• 关键词: HIV-1; アッセンブリ; gp41

HIV-1のアッセンブリはウイルスタンパク質のみならず宿主タンパク賛、脂質二重膜をも含む高分子間相互作用を伴う過程で感染性のウイルス産生に不可欠である。理論的に、この過程をウイルス向性ドメインと阻害ドメインからなる融合タンパク質をウイルス粒子にターゲットすることによって組害できる可能性がある。この阻害はウイルスタンパク質の発現そのものではなくその相互作用を阻害する機構によるため,ウイルスタンパク質による宿主免疫系に対する刺激は温存しつつ産生されるウイルスは不活化するという相乗効果を持つと考えられる。その様な分子の一つの候補であるVpxとgp41融合タンパク質(P28)による阻害機構の解析を試みた。従来、あるリコンビナントタンパク質のHIV-1複製に対する阻害効果評価のために用いられてきた共トランスフェクションにみられたアッセイ毎のばらつきを押さえアッセイを簡便化する目的でp28発現モジュールを感染性HIV-1プロウイルスDNAブラスミド上に組み込んだ。これにより事実上DNAの標的細胞への導入が1:1の比でできる。このDNAをCOS細胞に導入し、vpx-gp41融合タンパク質が産生されるウイルスの複製およびprotein pr ofileにどのような影響を与えるかを検討した結果、p28を共発現させると産生されるウイルスタンパク質のプロセツシングは一部影響を受けるもののウイルス粒子は産生され、そのウイルスではGag/Env比に変化が見られることがわかった。gp41中のサブドメインのどこに阻害効果が起因するのかを検討したが、gp41中に見られる二つのamphipoathic helicesの一方だけでは顕著な阻害効果を示さないことがわかった。

HIV-1 的组装对于感染性病毒的产生至关重要，该过程涉及大分子相互作用，不仅涉及病毒蛋白，还涉及宿主蛋白和脂质双层膜。理论上，可以通过用由病毒向性结构域和抑制结构域组成的融合蛋白靶向病毒颗粒来破坏这一过程。由于这种抑制是基于抑制病毒蛋白相互作用而不是蛋白本身表达的机制，因此被认为具有协同效应，即所产生的病毒被灭活，同时病毒刺激宿主免疫系统。蛋白质被保留。我们试图分析 Vpx 和 gp41 融合蛋白 (P28) 的抑制机制，该融合蛋白是此类分子的候选之一。为了简化测定并减少共转染中观察到的变异性（传统上用于评估某种重组蛋白对 HIV-1 复制的抑制作用），将 p28 表达模块转导到感染性 HIV-1 中。前病毒DNA被整合到质粒上。这有效地允许 DNA 以 1:1 的比例引入靶细胞。我们将此 DNA 引入 COS 细胞，并检查 vpx-gp41 融合蛋白如何影响所产生病毒的复制和蛋白质生产，尽管加工受到部分影响，但仍产生了病毒颗粒，并且病毒显示出 Gag/Env 比率的变化。 。我们研究了 gp41 中的哪个子结构域引起抑制作用，并发现单独在 gp41 中发现的两个两性螺旋之一并不表现出显着的抑制作用。