イントロンレスRNAの核外輸送機構

无内含子RNA的核输出机制

基本信息

批准号：
10174227
负责人：
木村富紀
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174227/
关键词：
HBV HBVPRE イントロンレスRNA HIV-1 Rev CRMI アクチン RNA核外輸送

项目摘要

HIV-1 Rev蛋白の核外輸送シグナル(NES)に対応する細胞固有のRNA輸送機構を個々の細胞レベルで解析する目的で、Fluorescence in situ hybridizationに免疫蛍光染色を組み合わせ、ウイルス構造蛋白mRNA(RRE RNA)とRev或いはRNA輸送に関わる細胞因子が同一細胞において観察可能な実験系を構築した。同系を用いてRRE RNAの核外輸送を検討したところ、Rev-NESにおいてそのレセプターであるCRM1と、Ranが複合体を形成することにより核内にアクチン線維束が形成され、しかも核膜を超え細胞質と連絡するこの線維束に乗ってRcv-RNA複合体が核内外を結ぶ像が観察された。この線維束は免疫電顕的にも確認され、またCytochalasin B或いはLatrunculin Bを用いたFアクチンの脱重合によりRRE RNAの核外輸送が阻害された事から、Rev-NESに対応する細胞固有のRNA輸送機構としてアクチン線維束が関与している事が考えられた。このイントロンを含むRNAの核外輸送系がPREにより調節されるB型肝炎ウイルス(HBV)のイントロンレスRNA輸送への関与を知る目的で、HIVとHBV RNAの核外輸送系に共通の細胞因子が用いられる可能性を検討した。その結果、輸送に関わる細胞因子を特異的に吸着するヒト白血病ウイルスRex蛋白のドミナントネガティブ変異体はRev/RREとPRE輸送系に対し共に阻害効果を発揮したが、CRM1の共発現によりRNA輸送が代償されたのは前者の輸送系のみであった。またPRE RNAは核内において線状構造をとらず、アクチン線維束の形成も認められなかった。以上の結果から、HBV PREはCRM1とは異なる細胞因子の関与の下Rev/RRE輸送系とは別個の輸送系を介してHBVイントロンレスRNAを核外輸送すると結論づけた。

为了分析与单个细胞水平上HIV-1 REV蛋白的核出口信号（NES）相对应的细胞特异性RNA转运机制，我们将免疫荧光染色与荧光原位杂交结合在一起，与构建一个实验性系统，在该系统中，病毒结构蛋白mRNA（RRE RNA）（RRE RRA）和REN CALL中的细胞相同。当使用同一基因研究RRE RNA的核转运时，我们观察到，在Rev-NES中，当受体CRM1和跑步形成一个复杂的肌动蛋白纤维束时，肌动蛋白纤维束，而肌动蛋白纤维束在核中形成，并且RCV-RNA复合物在该细胞质上连接到了核能，以射击核能，从而使RCV-RNA络合物连接到核能上，以射击核能。该束也通过免疫电子显微镜证实，并且是因为使用细胞切拉蛋白B或Latrunculin B对F-肌动蛋白的解聚，抑制了RRE RNA的核转运，因此人们认为肌动蛋白捆绑包作为细胞特异性RNA转运机制与与Rev-NES相应的相对应。为了了解丙型肝炎病毒（HBV）参与不固定的RNA转运，该转运受PRE的调节，我们研究了可以使用HIV和HBV RNA核出口系统常见的细胞因子。结果，人类白血病病毒雷克斯蛋白的主要阴性突变体，该蛋白特别吸附了涉及运输的细胞因子，都抑制了REV/RRE和前运输系统，但只有以前的运输系统通过CRM1的共表达来补偿RNA运输。此外，PRE RNA在细胞核中没有线性结构，也没有观察到肌动蛋白纤维的形成。从这些结果中，我们得出的结论是，HBV通过与REV/RRE运输系统分开的传输系统在与CRM1不同的细胞因子的参与下通过转运系统分离出HBV HBV无固定的RNA。