イントロンレスRNAの核外輸送機構

无内含子RNA的核输出机制

基本信息

批准号：
10174227
负责人：
木村富紀
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174227/
关键词：
HBV HBVPRE イントロンレスRNA HIV-1 Rev CRMI アクチン RNA核外輸送

项目摘要

HIV-1 Rev蛋白の核外輸送シグナル(NES)に対応する細胞固有のRNA輸送機構を個々の細胞レベルで解析する目的で、Fluorescence in situ hybridizationに免疫蛍光染色を組み合わせ、ウイルス構造蛋白mRNA(RRE RNA)とRev或いはRNA輸送に関わる細胞因子が同一細胞において観察可能な実験系を構築した。同系を用いてRRE RNAの核外輸送を検討したところ、Rev-NESにおいてそのレセプターであるCRM1と、Ranが複合体を形成することにより核内にアクチン線維束が形成され、しかも核膜を超え細胞質と連絡するこの線維束に乗ってRcv-RNA複合体が核内外を結ぶ像が観察された。この線維束は免疫電顕的にも確認され、またCytochalasin B或いはLatrunculin Bを用いたFアクチンの脱重合によりRRE RNAの核外輸送が阻害された事から、Rev-NESに対応する細胞固有のRNA輸送機構としてアクチン線維束が関与している事が考えられた。このイントロンを含むRNAの核外輸送系がPREにより調節されるB型肝炎ウイルス(HBV)のイントロンレスRNA輸送への関与を知る目的で、HIVとHBV RNAの核外輸送系に共通の細胞因子が用いられる可能性を検討した。その結果、輸送に関わる細胞因子を特異的に吸着するヒト白血病ウイルスRex蛋白のドミナントネガティブ変異体はRev/RREとPRE輸送系に対し共に阻害効果を発揮したが、CRM1の共発現によりRNA輸送が代償されたのは前者の輸送系のみであった。またPRE RNAは核内において線状構造をとらず、アクチン線維束の形成も認められなかった。以上の結果から、HBV PREはCRM1とは異なる細胞因子の関与の下Rev/RRE輸送系とは別個の輸送系を介してHBVイントロンレスRNAを核外輸送すると結論づけた。

为了在个体细胞水平上分析与HIV-1 Rev蛋白的核输出信号（NES）相对应的细胞特异性RNA转运机制，我们将荧光原位杂交与免疫荧光染色相结合，构建了一个实验系统。 RNA（RNA）和Rev或参与RNA转运的细胞因子可以在同一细胞中观察到。当我们使用相同的系统研究RRE RNA的核输出时，我们发现在Rev-NES中，由于Ran与其受体CRM1之间形成复合物，肌动蛋白纤维束在细胞核中形成，并且它们也穿过细胞核观察到 Rcv-RNA 复合物在细胞核内外移动的图像，该复合物骑在与细胞质连通的纤维束上。该纤维束也通过免疫电子显微镜得到证实，并且使用细胞松弛素 B 或 Latrunculin B 解聚 F-肌动蛋白可以抑制 RRE RNA 的核输出。肌动蛋白纤维束被认为参与了 RNA 转运机制。为了了解这种含内含子的 RNA 核输出系统在乙型肝炎病毒 (HBV) 的无内含子 RNA 转运中的参与（受 PRE 调节），我们研究了 HIV 和 HBV 核输出系统常见的细胞因子我们研究了使用RNA的可能性。结果，人类白血病病毒Rex蛋白的显性失活突变体特异性吸附参与运输的细胞因子，对Rev/RRE和PRE运输系统均产生抑制作用，但CRM1的共表达仅抑制RNA运输。以前的交通系统得到了补偿。此外，PRE RNA在细胞核中没有形成线性结构，并且没有观察到肌动蛋白纤维束的形成。根据以上结果，我们得出结论，HBV PRE通过与Rev/RRE转运系统不同的转运系统将HBV无内含子RNA转运出细胞核，并涉及与CRM1不同的细胞因子。