線虫C.elegansの神経回路形成に関与するMAPキナーゼ経路の解析

参与线虫神经回路形成的 MAP 激酶通路分析

基本信息

批准号：
10171212
负责人：
久本直毅
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10171212/
关键词：
MAPキナーゼ

项目摘要

我々はこれまでに線虫C.elegansの新規のMAPKであるjnk-1(前遺伝子名sak-1)と、新規のMAPKKであるjkk-1(前遺伝子名sek-2)を単離している。また、それらの遺伝子がそれぞれ神経細胞で特異的に発現をしていることも確認している。今年度はjkk-1変異株の解析を主に行った。まず、jkk-1遺伝子が必要とされる時期を特定するために、jkk-1を線虫のヒートショックプロモーターにつないだものを作製し、jkk-1破壊株に導入後、染色体に組み込んだ系統を確立した。次に、この系統の個体に対して、幼虫期および成虫期にそれぞれヒートショックを与えてjkk-1を発現させたあと、jkk-1変異が相補されるかどうかについて解析した。その結果、幼虫の時期でも成虫の時期でもヒートショックを与えた後で、十分な時間(>12hr)おいた場合には相補されていることが判明した。このことは、jkk-1破壊株の表現型は不可逆的なものではないことを示唆している。しかし、ヒートショックを与えた後に表現型の回復がみられるまで非常に時間がかかる(コントロール遺伝子では、ヒートショックをかけたあと3時間後には遺伝子の発現が見られる)ことから、jkk-1はおそらく非常に時間のかかる過程、例えば神経細胞の構造の制御とか、複数の段階の転写を介するカスケードなどに関与すると考えられる。

到目前为止，我们已从线虫中分离出一种新的 MAPK，jnk-1（前基因名称 sak-1）和一种新的 MAPKK，jkk-1（前基因名称 sek-2）。还已经证实，这些基因中的每一个都在神经细胞中特异性表达。今年，我们主要分析了jkk-1突变株。首先，为了确定需要jkk-1基因的时间，我们创建了一个将jkk-1连接到秀丽隐杆线虫热休克启动子的基因，将其引入jkk-1破坏的菌株中，然后将其整合到染色体建立。接下来，该品系的个体在幼虫和成虫阶段进行热休克以表达jkk-1，然后我们分析jkk-1突变是否互补。结果发现，当幼虫和成虫阶段热休克后给予足够的时间（>12小时）时，就会发生互补。这表明 jkk-1 破坏菌株的表型并非不可逆转。然而，热休克后表型的恢复需要非常长的时间（用对照基因，热休克后3小时观察到基因表达），所以jkk-1很可能涉及非常缓慢的过程，例如神经元的调节结构或多步转录级联。