ヒト癌細胞のシスプラチン感受性決定因子としての相同組み換え関連遺伝子群の役割-ノックアウト細胞株と肺癌細胞株による検討-

同源重组相关基因作为人类癌细胞顺铂敏感性决定因素的作用 - 使用敲除细胞系和肺癌细胞系进行的研究 -

• 批准号: 10153229
• 负责人: 高田 穣
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10153229/
• 关键词: シスプラチン; Rad51関連遺伝子群; ジーンターゲティング; 肺ガン細胞株; 相同DNA組み換え機構

抗癌剤シスプラチン(以下、シス)に対する癌細胞の耐性克服は臨床上重要な問題であり、耐性発現の機序の一つとしてDNA修復亢進が確立されている。シスによるDNAダメージ修復機構については、現在まで主にヌクレオチド除去修復機構(NER)が検討されてきたが、他の修復経路の関与についての詳細は不明であった。一方、細胞内ゲノムDNAの二重鎖切断(DSB)の修復経路の一つに、相同DNA組み換え機構(homologous recombination,HR)がある。本研究では、これに関わる遺伝子として同定されたRad51類似遺伝子5種類(Rad51B、Rad51C、Rad51D、Xrcc2、Xrcc3)全てのニワトリ遺伝子を単離し、それぞれの変異細胞株をジーンターゲティング効率の高いニワトリB細胞株DT40において遺伝子破壊して樹立した。全ての変異株においてシス感受性は非常に上昇しており、その程度はほぼ同等と考えられ、軽度の放射線感受性に比べて特徴的であった。また、これら変異細胞株にヒト或いはマウスの対応遺伝子を発現させることによりシスプラチン感受性は正常化し、さらに発現量の多いクローンにおいてはしばしば野生型以上の耐性を示した。これらの結果から、ヒトガンでRad51類似遺伝子の発現量が増した場合、抗癌剤耐性に関与する可能性が考えられた。現在ヒト小細胞肺癌株SBC-3とそのシス耐性サブラインなどを用いて、発現量の比較やタグ付きRad51Bの強制発現を試みている。以上よりシスによるDNAダメージ修復に従来から言われていたNERだけでなく、HRが関与することが明らかとなった。HRにおいて機能する多数の蛋白のなかでも特にRad51類似遺伝子群が重要であり、これらの遺伝子産物の発現量の変化でシスの感受性・耐性が変化する可能性が考えられる。肺癌細胞株で実際にこれらの遺伝子産物の発現に変化があるか、さらに肺癌細胞株に強制発現させて感受性が変化するがどうが今後さらに検討を必要とする。

克服癌细胞对抗癌药物顺铂（以下称为顺式）的抗性是临床上重要的问题，并且已确定DNA修复是抗性发展的机制之一。迄今为止，核苷酸切除修复机制（NER）主要研究了CIS的DNA损伤修复机制，但尚不知道有关其他修复途径参与的详细信息。另一方面，细胞内基因组DNA中双链断裂（DSB）的修复途径之一是同源重组（HR）。在这项研究中，所有五种类型的鸡基因（RAD51B，RAD51C，RAD51D，XRCC2，XRCC3）均被隔离为基因，并且通过破坏鸡B细胞系DT40中的基因来确定每个突变细胞系，该基因具有高基因靶向效率。在所有突变体中，顺式灵敏度显着提高，并且被认为与轻度辐射敏感性相比，在程度上大致相等。此外，通过在这些突变细胞系中表达人或小鼠的相应基因，将顺铂灵敏度归一化，并且具有高表达水平的克隆通常表现出对野生型或更高型的抗性。这些结果表明，如果RAD51样基因的表达水平在人类癌症中增加，则可能与抗癌耐药性有关。目前，我们正在尝试使用人类小细胞肺癌菌株SBC-3及其顺式耐药性subline比较表达水平并强行表达标记的RAD51B。从上面的角度来看，不仅据说不仅据说可以通过CI修复DNA损伤，而且还涉及HR。在HR中起作用的众多蛋白质中，rad51样基因组特别重要，并且这些基因产物表达水平的变化可能会改变顺式的敏感性和抗性。这些基因产物在肺癌细胞系中的表达是否存在实际变化，并且在肺癌细胞系中的强制表达改变了产物的敏感性，将来需要进一步考虑。

项目成果

Sonoda E et al: "Rad51 deficient veitebrate cells accumulate clumosomal brealcs prior to cell death" EMBO J.17・2. 598-608 (1998)

Sonoda E 等人：“Rad51 缺陷的veitebrate 细胞在细胞死亡前积累丛毛体” EMBO J.17・2 (1998)。