Ahリセプターによる転写活性化と作用する遺伝子の解析

Ah 受体及其作用基因的转录激活分析

基本信息

批准号：
10151203
负责人：
十川和博
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10151203/
关键词：
転写抑制因子外来異物代謝ダイオキシン PASドメイン

项目摘要

Ahリセプター(AhR)とbHLH-PASドメインの一次構造が類似した、新規のPASタンパク質、Ahリセプターリプレッサー(AhRR)をクローニングし、性質を調べた。AhRRはArntとヘテロダイマーを形成し、AhR-Arntが結合するXRE配列に結合した。AhRRは分子のC末端側に転写抑制ドメインをもち、ヘテロダイマーを作ることにより、Arntのもつ転写促進活性を完全に抑えた。AhRとArntによる転写活性化系に、AhRRを発現させていくと、AhRの転写活性化能は、AhRRの発現量依存的に減少した。以上の結果から、AhRRはAhRに競争するかたちで、Arntとへテロダイマーを形成し、XREに結合し、AhRの転写促進活性を抑制することが分かった。さらに、AhRR遺伝子を単離し、その遺伝子上流を構造解析した結果、XREが2ヶ所存在した。そこでAhRR遺伝子上流をルシフェラーゼに接合し、培養細胞にトランスフェクションした。その結果、メチルコランスレンの投与により、ルシフェラーゼ活性は誘導された。以上の結果は、AhRRはAhRによって誘導され、発現したAhRRはAhRの活性を抑えるという、負のフィードバック機構が存在することを示している。ダイオキシンによる奇形誘発作用に関与する遺伝子を見いだす目的で、妊娠マウスにダイオキシンを投与し、胎仔からmRNAを調製した。このmRNAを用いて、マイクロアレイ法で、ダイオキシンで、活性化される遺伝子と、抑制される遺伝子をスクリーニングした。いくつかの興味深い遺伝子が同定され、現在はそれらの胎仔での発現部位、奇形が発生する組織での発現を調べている。

检查了一种新的PAS蛋白AH依赖器覆盖率（AHRR），该蛋白与AH恢复器（AHR）的主要结构和BHLH-PAS结构域相似，以检查这些特性。 AHRR形成ARNT和异二聚体，并与AHR-ARNT结合的XRE序列结合。 AHRR在分子的C末端具有转录抑制域，并且异二聚体完全降低了ARNT的转录促进活性。当使用AHR和ARNT在转录激活系统中表达AHRR时，AHR的转录激活能力在AHRR的表达方面降低。从上述结果中可以发现，AHRR与AHR竞争，用ARNT形成了恐怖的魔法，与XRE结合并抑制AHR的转录促进活动。此外，由于AHRR基因的分离和上游基因的结构分析的结果，有两个XRE。因此，将AHRR基因的上游连接到荧光素酶并转染到培养细胞中。结果，通过荧光素酶活性诱导甲基克氏素的给药。以上结果表明AHRR是由AHR诱导的，并且已表达的AHRR具有抑制AHR活性的负反馈机制。将二恶英送到孕妇小鼠中，目的是发现涉及型号畸形Trigg的基因，并从胎儿中制备mRNA。使用此mRNA，微层次方法在二恶英和抑制基因中尖叫了激活的基因。已经确定了几个有趣的基因，现在正在研究胎儿的表达以及发生畸形的组织中的表达。