トロンボポエチン受容体と細胞内シグナル伝達機構の解析

血小板生成素受体及细胞内信号转导机制分析

基本信息

批准号：
08671252
负责人：
小松則夫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671252/
关键词：
トロンボポエチン巨核球分化 UT-7 TPO EPO 細胞内シグナル伝達 c-mpl

项目摘要

トロンボトエチン(TPO)は巨核球・血小板産生を特異的に促進するサイトカインである。そのレセプターはc-mpl遺伝子によってコードされ、他のサイトカインレセプタースーパーファミリーのメンバーと同様に細胞内にキナーゼドメインを持たないが、TPO刺激により早期に多くの蛋白のチロシンリン酸化が誘導される。我々は白血病細胞株UT-7からTPOに増殖依存性を有し、成熟巨核球の性格を持つ亜株UT-7/TPO細胞株を樹立し、この細胞株を用いてTPOシグナル伝達の解析を行い、JAK-STAT系,RAS-MAPK系、そしてイノシトールリン脂質系がTPO刺激により活性化されることを明らかにし(Blood 89:552,1996;Biochem.Biophys.Res.Commun.217:230,1995;Biochem.Biophys.Res.Commun.in press)。さらに完全長型c-mplPcDNAを内因性にc-mplを発現していないUT-7/EPO細胞株に遺伝子導入し、TPOによって増殖分化が観察できる系を確立した。TPOによってトランスフェクタントは大型化し、巨核球様の細胞に変化し、糖蛋白IIb/IIIaの発現量も増加した。そこでTPOレセプターの細胞内ドメインの機能を解析するために我々はc-mplの種々のdeletion mutantを作製し、UT-7/EPO細胞に遺伝子導入し、巨核球の分化、細胞増殖、チミジン取り込みによるDNA合成について解析した。細胞増殖や巨核球分化に必須な領域はアミノ酸575-586とアミノ酸615-630にあり、アミノ酸587-614には細胞増殖や巨核球分化を負に制御する領域が存在することが明らかになった。DNA合成に必須な領域はアミノ酸565-574であり、DNA合成が誘導されても細胞増殖に必ずしも結び付くものではないこともわかった(J.Biol.Chem.In press)。

血栓蛋白（TPO）是一种细胞因子，专门促进巨核细胞和血小板产生。该受体由C-MPL基因编码，与其他细胞因子受体超家族成员一样，没有细胞内激酶结构域，但是TPO刺激诱导许多较早的蛋白质酪氨酸磷酸化。 We established a sub-strain UT-7/TPO cell line with a proliferation dependence on TPO from the leukemia cell line UT-7 and a mature megakaryocyte character, and used this cell line to analyze TPO signaling, revealing that the JAK-STAT system, RAS-MAPK system, and inositol phospholipid system are activated by TPO stimulation (Blood 89:552, 1996;生物化学。此外，将全长C-MPLPCDNA转移到未表达C-MPL的UT-7/EPO细胞系中，并建立了TPO可以观察到增殖和分化的系统。 TPO导致转染剂的扩大，将其转化为巨核细胞样细胞，而糖蛋白IIB/IIIA的表达水平增加。因此，为了分析TPO受体的细胞内结构域的功能，我们创建了C-MPL的各种缺失突变体，转染到UT-7/EPO细胞中，并分析了甲状腺素摄取的巨核细胞，细胞增殖和DNA合成的分化。在氨基酸575-586和615-630上发现了细胞增殖和巨核细胞分化所必需的区域，并且已经发现氨基酸587-614的区域对细胞增殖和巨核细胞的分化有负调节区域。 DNA合成必不可少的区域是氨基酸565-574，还发现诱导的DNA合成不一定会导致细胞增殖（J.Biol。Chem。in Press）。