トロンボポエチン受容体と細胞内シグナル伝達機構の解析

血小板生成素受体及细胞内信号转导机制分析

基本信息

批准号：
08671252
负责人：
小松則夫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671252/
关键词：
トロンボポエチン巨核球分化 UT-7 TPO EPO 細胞内シグナル伝達 c-mpl

项目摘要

トロンボトエチン(TPO)は巨核球・血小板産生を特異的に促進するサイトカインである。そのレセプターはc-mpl遺伝子によってコードされ、他のサイトカインレセプタースーパーファミリーのメンバーと同様に細胞内にキナーゼドメインを持たないが、TPO刺激により早期に多くの蛋白のチロシンリン酸化が誘導される。我々は白血病細胞株UT-7からTPOに増殖依存性を有し、成熟巨核球の性格を持つ亜株UT-7/TPO細胞株を樹立し、この細胞株を用いてTPOシグナル伝達の解析を行い、JAK-STAT系,RAS-MAPK系、そしてイノシトールリン脂質系がTPO刺激により活性化されることを明らかにし(Blood 89:552,1996;Biochem.Biophys.Res.Commun.217:230,1995;Biochem.Biophys.Res.Commun.in press)。さらに完全長型c-mplPcDNAを内因性にc-mplを発現していないUT-7/EPO細胞株に遺伝子導入し、TPOによって増殖分化が観察できる系を確立した。TPOによってトランスフェクタントは大型化し、巨核球様の細胞に変化し、糖蛋白IIb/IIIaの発現量も増加した。そこでTPOレセプターの細胞内ドメインの機能を解析するために我々はc-mplの種々のdeletion mutantを作製し、UT-7/EPO細胞に遺伝子導入し、巨核球の分化、細胞増殖、チミジン取り込みによるDNA合成について解析した。細胞増殖や巨核球分化に必須な領域はアミノ酸575-586とアミノ酸615-630にあり、アミノ酸587-614には細胞増殖や巨核球分化を負に制御する領域が存在することが明らかになった。DNA合成に必須な領域はアミノ酸565-574であり、DNA合成が誘導されても細胞増殖に必ずしも結び付くものではないこともわかった(J.Biol.Chem.In press)。

血小板生成素（TPO）是一种特异性促进巨核细胞和血小板生成的细胞因子。该受体由 c-mpl 基因编码，与细胞因子受体超家族的其他成员一样，不具有细胞内激酶结构域，但 TPO 刺激会诱导许多蛋白质的早期酪氨酸磷酸化。我们从白血病细胞系 UT-7 中建立了亚系 UT-7/TPO 细胞系，该细胞系增殖依赖于 TPO，并具有成熟巨核细胞的特征，并使用该细胞系来分析 TPO 信号转导。 TPO刺激（血液）激活STAT系统、RAS-MAPK系统和肌醇磷脂系统89：552，1996；Biochem.Biophys.Res.Commun.217：230，1995；Biochem.Biophys.Res.Commun.正在出版）。此外，我们将全长c-mplP cDNA内源导入不表达c-mpl的UT-7/EPO细胞系中，并建立了可以通过TPO观察增殖和分化的系统。 TPO增加了转染子的大小，将其转化为巨核细胞样细胞，并增加了糖蛋白IIb/IIIa的表达水平。因此，为了分析TPO受体胞内结构域的功能，我们创建了多种c-mpl缺失突变体并将其转染至UT-7/EPO细胞中，引起巨核细胞分化、细胞增殖和胸苷DNA掺入。进行了合成分析。已揭示氨基酸575-586和615-630是细胞增殖和巨核细胞分化的必需区域，并且氨基酸587-614中存在负调节细胞增殖和巨核细胞分化的区域。还发现DNA合成的必需区域是氨基酸565-574，即使诱导DNA合成，也不一定会导致细胞增殖（J. Biol. Chem. In press）。