ヒト末梢血樹状細胞による癌免疫療法の基礎及び臨床研究

人外周血树突状细胞癌症免疫治疗的基础与临床研究

基本信息

批准号：
08670513
负责人：
高見沢勝
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

樹状細胞は不均一な細胞集団である。我々は末梢血より一次免疫応答誘導能をもつ樹状細胞の分離法を確立してきた。しかし、その由来となる前駆細胞の性状については全く不明であった。それを明らかにすることで現在癌の免疫治療に応用されるようになった樹状細胞の分離法を改善しさらに担癌患者への臨床応用をおこなった。末梢血単核球をフィコール比重遠心法で分離後、パニング法によりT、B、N、K細胞及び単球を除いた残りの細胞を抗HLA-DR抗体FITCと抗CD2抗体PEで二重染色しフローサイトメトリーで解析した。HLA-DR brightの細胞分画はCD2(-)とCD2(+)の2つに分画された。HLA-DR dullの細胞分画はCD34(+)CD2(-)で幹細胞と推定された。抗原提示分子をもつHLA-DRbright、CD2(-)とCD2(+)分画をセルソーターにより精製した。両前駆細胞とも光学顕微鏡、電子顕微鏡下ではリンパ球より若干大型の円形の形態を示し、細胞質内に顆粒を有していた。両前駆細胞には蛋白抗原に対する抗原提示能はないが、分化して樹状様の形態に変化するとCD2(-)細胞由来の樹状細胞は二次免疫応答のみを誘導し、CD2(+)細胞由来の樹状細胞は一次、二次両方の免疫応答を誘導した。一次免疫応答誘導能をもつ前駆細胞はCD2(+)分画にありそのフェノタイプはCDla+,CDlc+,CD4+,CD33+,CD40+,CD54+,CD86+,HLA-A,B,C,DR,DQ,DP bright,lineage negativeで分化に伴いCD2,CD4,CD33の発現が低下し、CD40,CD54,CD80,CD86などの接着分子の発現が増強した。これら前駆細胞は末梢血単核球の0.5%以下であった。単核球からone layer Percollで樹状細胞を分離する方法を確立した。腫瘍lysateを抗原として肝癌、肺癌、大腸癌患者に樹状細胞ワクチン療法を開始した。

树突状细胞是异质细胞群。我们建立了一种分离树突状细胞的方法，该树突状细胞能够从外周血中诱导初级免疫反应。然而，它们起源的祖细胞的特性完全未知。通过澄清这一点，我们改进了目前应用于癌症免疫治疗的分离树突状细胞的方法，并进一步将其应用于临床癌症患者。通过Ficoll离心分离外周血单核细胞后，用淘选法对除T、B、N、K细胞和单核细胞外的其余细胞进行抗HLA-DR抗体FITC和抗CD2抗体PE双染色并进行流式细胞术分析。。 HLA-DR亮细胞部分分为两部分：CD2(-)和CD2(+)。 HLA-DR钝细胞部分为CD34(+)CD2(-)，推测为干细胞。使用细胞分选仪纯化含有抗原呈递分子的 HLA-DRbright、CD2(-) 和 CD2(+) 级分。光镜和电镜下，两种祖细胞均呈圆形，略大于淋巴细胞，胞浆内有颗粒。两种祖细胞都不具备将抗原呈递给蛋白质抗原的能力，但当它们分化并转变为树突样形态时，源自CD2(-)细胞的树突细胞仅诱导二次免疫反应，而CD2(+)细胞衍生的树突细胞诱导初级和次级免疫反应。 CD2(+)部分中发现能够诱导初级免疫反应的祖细胞，其表型为CDla+、CDlc+、CD4+、CD33+、CD40+、CD54+、CD86+、HLA-A、B、C、DR、DQ、DP Bright . , 血统在阴性细胞中，随着分化，CD2、CD4和CD33的表达减少，而CD40、CD54、CD80和CD86等粘附分子的表达增加。这些祖细胞占外周血单个核细胞的比例不到0.5%。我们建立了一种使用一层 Percoll 将树突状细胞与单核细胞分离的方法。使用肿瘤裂解物作为抗原的树突状细胞疫苗疗法开始用于肝癌、肺癌和结直肠癌患者。