ヒト末梢血樹状細胞による癌免疫療法の基礎及び臨床研究

人外周血树突状细胞癌症免疫治疗的基础与临床研究

• 批准号: 08670513
• 负责人: 高見沢 勝
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670513/
• 关键词: 樹状細胞; 樹状前駆細胞; CD2(+)前駆細胞; 一次免疫応答; 二次免疫応答; 腫瘍抗原; ワクチン療法; 慢性骨髄性白血病; maliguant germunoma; 養子免疫療法; 末梢血樹状細胞; 幹細胞; 癌特異抗原; 大腸癌; B細胞悪性リンパ腫; キラーT細胞; 樹状幹細胞; イディオタイプ; メラノーマ特異抗原; MAGE; 樹状細胞; 樹状前駆細胞; CD2(+)前駆細胞; 一次免疫応答; 二次免疫応答; 腫瘍抗原; ワクチン療法; 慢性骨髄性白血病; maliguant germunoma; 養子免疫療法; 末梢血樹状細胞; 幹細胞; 癌特異抗原; 大腸癌; B細胞悪性リンパ腫; キラーT細胞; 樹状幹細胞; イディオタイプ; メラノーマ特異抗原; MAGE

樹状細胞は不均一な細胞集団である。我々は末梢血より一次免疫応答誘導能をもつ樹状細胞の分離法を確立してきた。しかし、その由来となる前駆細胞の性状については全く不明であった。それを明らかにすることで現在癌の免疫治療に応用されるようになった樹状細胞の分離法を改善しさらに担癌患者への臨床応用をおこなった。末梢血単核球をフィコール比重遠心法で分離後、パニング法によりT、B、N、K細胞及び単球を除いた残りの細胞を抗HLA-DR抗体FITCと抗CD2抗体PEで二重染色しフローサイトメトリーで解析した。HLA-DR brightの細胞分画はCD2(-)とCD2(+)の2つに分画された。HLA-DR dullの細胞分画はCD34(+)CD2(-)で幹細胞と推定された。抗原提示分子をもつHLA-DRbright、CD2(-)とCD2(+)分画をセルソーターにより精製した。両前駆細胞とも光学顕微鏡、電子顕微鏡下ではリンパ球より若干大型の円形の形態を示し、細胞質内に顆粒を有していた。両前駆細胞には蛋白抗原に対する抗原提示能はないが、分化して樹状様の形態に変化するとCD2(-)細胞由来の樹状細胞は二次免疫応答のみを誘導し、CD2(+)細胞由来の樹状細胞は一次、二次両方の免疫応答を誘導した。一次免疫応答誘導能をもつ前駆細胞はCD2(+)分画にありそのフェノタイプはCDla+,CDlc+,CD4+,CD33+,CD40+,CD54+,CD86+,HLA-A,B,C,DR,DQ,DP bright,lineage negativeで分化に伴いCD2,CD4,CD33の発現が低下し、CD40,CD54,CD80,CD86などの接着分子の発現が増強した。これら前駆細胞は末梢血単核球の0.5%以下であった。単核球からone layer Percollで樹状細胞を分離する方法を確立した。腫瘍lysateを抗原として肝癌、肺癌、大腸癌患者に樹状細胞ワクチン療法を開始した。

树突状细胞是异质细胞群体。我们已经建立了一种分离具有诱导原发性免疫反应的树突状细胞的方法，而不是外周血。但是，起源的祖细胞的特性是完全未知的。通过澄清这一点，我们改善了分离树突状细胞的方法，树突状细胞现在已应用于癌症的免疫疗法，并在癌症患者中有进一步的临床应用。通过FICOLL特异性重力离心分离外周血单核细胞，其余细胞（不包括T，B，N，K细胞和单核细胞）用抗HLA-DR抗体FITC和抗CD2抗体PE进行双重染色，并通过流式细胞仪分析。 HLA-DR亮的细胞分数分为两个部分：CD2（ - ）和CD2（+）。 HLA-DR钝的细胞分数估计为具有CD34（+）CD2（ - ）的干细胞。携带抗原呈递分子的HLA-DRBRIGHT，CD2（ - ）和CD2（+）馏分通过细胞分类器纯化。两个祖细胞在光和电子显微镜下表现出比淋巴细胞略大的圆形形态，并且在细胞质中有颗粒。尽管两个祖细胞都无法对蛋白质抗原呈现抗原，但是当分化并变为树突状形态时，源自CD2（ - ）细胞的树突状细胞仅诱导二次免疫反应，而源自CD2（+）细胞的树突状细胞诱导了原发性免疫反应和继发性免疫反应。 Progenitor cells with the ability to induce primary immune responses are in the CD2(+) fraction, and their phenotypes are CDla+, CDlc+, CD4+, CD33+, CD40+, CD54+, CD86+, HLA-A, B, C, DR, DQ, DP bright, and lineage negative, and differentiation caused the expression of CD2, CD4, and CD33 to decrease, and the expression of粘附分子（例如CD40，CD54，CD80和CD86）得到了增强。这些祖细胞小于外周血单核细胞的0.5％。已经建立了一种用一层Percoll从单核细胞中分离树突状细胞的方法。肝癌，肺癌和结肠癌患者使用肿瘤裂解物作为抗原，开始了树突状细胞疫苗疗法。