ニワトリ抗体H鎖定常部遺伝子の構造と全構成

鸡抗体H链恒定区基因的结构和完整组成

基本信息

批准号：
08670145
负责人：
清水章
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ニワトリにおける抗体H鎖定常部遺伝子群の構成を分子生物学的手法によって明らかにし、またS、I領域が哺乳類のそれと類似した形で存在しているかなどについて塩基配列レベルでの解析を行なって、抗体H鎖定常部遺伝子群の発現制御機構を進化学的考察も含めて、総合的に理解することを目指した。遺伝子の組換えや繰り返し配列の解析を行うことを念頭に、その障害となる固体差(遺伝子多型)を排除するため、ニワトリにおける数少ない近交系のひとつであるV系統(H-B15)の肝臓DNAを用いてラムダファージ遺伝子ライブラリーを作製し、H鎖遺伝子J領域からμ鎖定常部までをカバーするクローン群を得た。このクローンを用いて、マウスのS領域(SμとSα)プローブとのクロスハイブリダイゼイションを行った結果、μ鎖定常部の上流側近傍に、マウスのSμ、Sα領域と弱く相同性のある領域を見い出した。この領域についてさらに解析するため、ここを含む、定常部第1エクソンの上流約5千塩基対の配列を決定したところ、上流側約4千塩基対と下流側(定常部遺伝子のすぐ上流)約千塩基対の2種のタンデムな繰り返し配列が存在することが判明した。この両者はいずれも、哺乳類のSμ領域の特徴である、5塩基を単位とする基本配列の繰り返しからできており、そのうち下流側の繰り返し基本配列、(C/T)(C/A)CAGはマウスのSμ、Sα領域の基本配列の相補鎖と相同であった。このことから、ニワトリでも遺伝子組換えによるクラススイッチが存在し、これを制御するS領域が存在することが強く予想される。実際のクラススイッチの際、この領域がどのように働いているかについて議論するには、他のアイソタイプについて同様の解析やその発現細胞における遺伝子構成などの解析が必要である。

在本研究中，我们利用分子生物学技术阐明了鸡体内抗体H链恒定区基因组的组成，并在核苷酸序列水平上分析了S和I区是否以与哺乳动物相似的形式存在。全面了解抗体重链恒定区基因的表达控制机制，包括进化方面的考虑。为了消除个体差异（遗传多态性），这可能会成为遗传重组和重复序列分析的障碍，我们开发了V品系（H-B15），这是少数近交鸡品系之一，并使用λ噬菌体基因库构建了该品系。获得了一组覆盖H链基因J区至μ链恒定区的克隆。使用该克隆与小鼠S区（Sμ和Sα）探针进行交叉杂交，结果发现与μ链恒定区上游附近的小鼠Sμ和Sα区存在弱同源性。 .我找到了我的领地。为了进一步分析该区域，我们测定了包括该区域在内的恒定区第一个外显子上游约5,000个碱基对的序列，发现上游约4,000个碱基对和下游约4,000个碱基对（紧邻恒定区上游）恒定区基因）发现存在两种类型的1,000个碱基对的串联重复序列。这两者均由5个碱基的重复基本序列组成，这是哺乳动物Sμ区的特征，下游的重复基本序列(C/T)(C/A)CAG与互补链同源小鼠Sμ和Sα区域的基本序列。由此强烈预测，鸡中也存在通过基因重组进行的类别转换，并且存在控制这种情况的 S 区域。为了讨论该区域在实际类别转换过程中如何发挥作用，有必要对其他同种型以及表达它们的细胞的基因组成进行类似的分析。