血管のアドレナージックα_<1A>,α_<1B>およびα_<1C>受容体mRNAの分布

血管中肾上腺素能α_<1A>、α_<1B>和α_<1C>受体mRNA的分布

基本信息

批准号：
08670118
负责人：
中西弘則
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ノルエピネフリンをウサギ摘出大動脈標本の内膜側から投与すると外膜側から投与した時より感受性が高いことを観察した。内膜側から投与したノルエピネフリンの収縮反応はプラゾシン(α_<1B>遮断薬)によって抑制され易く、外側から投与したノルエピネフリンの収縮反応はWB4101(α_<1A>遮断薬)によって抑制され易い。また、不可逆的なα_<1B>遮断薬であるクロロエチルクロニジンは内膜側から投与したノルエピネフリンの作用を抑制し易い。このことは血管の内膜側には主にα_<1B>受容体が外膜側にはα_<1A>受容体が分布している可能性を示している。そこで、ウサギ大動脈におけるアドレナージックα_1受容体サブタイプのmRNAの分布をin situハイブリダイゼーション法で検索することを計画した。現在知られているラットのα_1受容体サブタイプの塩基配列を基にアンチセンスとセンスオリゴヌクレオチドを作製した。ウサギ脳よりmRNAを抽出し、オリゴdTプライマーを用いて逆転写酵素によりcDNAサブフラグメントを合成した。その結果、ラットのα_<1A/D>(薬理学的にはα_<1D>受容体)と89.6%のホモロジーを有する336bpのcDNAサブフラグメント、ラットのα_<1b>(薬理学的にはα_<1B>受容体)と93.0%のホモロジーを有する472bpのcDNAサブフラグメントおよびラットのα_<1C>(薬理学的にはα_<1A>受容体)と89.6%のホモロジーを有する280bpのcDNAサブフラグメントを得ることが出来た。今後はウサギ大動脈よりmRNAを作製し、上記の^<32>P標本プローブでノーザンプロットを行いプローブの特異性を確認した後、ウサギ血管の凍結切片を作製し、上記特異性を確認したcDNAによりジゴキシゲニン標識プローブを作製し、in situハイブリダイゼーションを行なう。

据观察，从兔主动脉标本的内膜侧施用去甲肾上腺素，这比从异常侧施用时更容易受到敏感。从内膜侧施用的去甲肾上腺素的收缩反应很容易被prazosin（α__<1b>阻滞剂）抑制，并且从外部施用的去甲肾上腺素的收缩反应很容易被WB4101（α__<1A> Blocker）抑制。此外，从内膜侧施用的去甲肾上腺素的作用很容易抑制氯乙基氯苯氯乙基丙者，这是一种不可逆的α__<1b>阻滞剂。这表明α__<1b>受体主要分布在血管的内膜侧，而α__<1A>受体分布在外膜侧。因此，我们计划使用原位杂交方法搜索兔主动脉中肾上腺α_1受体亚型的mRNA分布。基于当前已知的大鼠α_1受体亚型的核苷酸序列制备反义和寡核苷酸。从兔子的大脑中提取mRNA，并使用抗氧化物引物使用逆转录酶合成cDNA亚片。结果，我们能够获得336 bp的cDNA亚膜，该亚膜与大鼠α_<1a/d>（药理学上α__<1d>受体）和89.6％同源性，472 bp cDNA cDNA cDNA cDNA cDNA用大鼠α___<1b>（药理上α__<1b> BEDER）和a NAMOGINAL和a 93.0％和a 93.0％和A A a，A.00000。 α_<1c>（药理学上α__<1a>受体）和89.6％的同源性。将来，将从兔主动脉产生mRNA，并使用上述 ^<32> P标本探针进行北部图以确认探针的特异性，准备兔血管的冷冻切除率，并使用cdna确认cdna are de peretity hy hymrications sere sere nive sere nive sere nive sere nive sere nive sere nive sere nive sere nive sere nive sere nive sere nive sere nive。