血管のアドレナージックα_<1A>,α_<1B>およびα_<1C>受容体mRNAの分布

血管中肾上腺素能α_<1A>、α_<1B>和α_<1C>受体mRNA的分布

基本信息

批准号：
08670118
负责人：
中西弘則
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ノルエピネフリンをウサギ摘出大動脈標本の内膜側から投与すると外膜側から投与した時より感受性が高いことを観察した。内膜側から投与したノルエピネフリンの収縮反応はプラゾシン(α_<1B>遮断薬)によって抑制され易く、外側から投与したノルエピネフリンの収縮反応はWB4101(α_<1A>遮断薬)によって抑制され易い。また、不可逆的なα_<1B>遮断薬であるクロロエチルクロニジンは内膜側から投与したノルエピネフリンの作用を抑制し易い。このことは血管の内膜側には主にα_<1B>受容体が外膜側にはα_<1A>受容体が分布している可能性を示している。そこで、ウサギ大動脈におけるアドレナージックα_1受容体サブタイプのmRNAの分布をin situハイブリダイゼーション法で検索することを計画した。現在知られているラットのα_1受容体サブタイプの塩基配列を基にアンチセンスとセンスオリゴヌクレオチドを作製した。ウサギ脳よりmRNAを抽出し、オリゴdTプライマーを用いて逆転写酵素によりcDNAサブフラグメントを合成した。その結果、ラットのα_<1A/D>(薬理学的にはα_<1D>受容体)と89.6%のホモロジーを有する336bpのcDNAサブフラグメント、ラットのα_<1b>(薬理学的にはα_<1B>受容体)と93.0%のホモロジーを有する472bpのcDNAサブフラグメントおよびラットのα_<1C>(薬理学的にはα_<1A>受容体)と89.6%のホモロジーを有する280bpのcDNAサブフラグメントを得ることが出来た。今後はウサギ大動脈よりmRNAを作製し、上記の^<32>P標本プローブでノーザンプロットを行いプローブの特異性を確認した後、ウサギ血管の凍結切片を作製し、上記特異性を確認したcDNAによりジゴキシゲニン標識プローブを作製し、in situハイブリダイゼーションを行なう。

我们观察到，从离体兔主动脉标本的内膜侧给药时，去甲肾上腺素比从外膜侧给药时更敏感。从内膜侧给予的去甲肾上腺素的收缩反应容易被哌唑嗪（α_1B>阻滞剂）抑制，而从外部给予的去甲肾上腺素的收缩反应容易被WB4101（α_1A>阻滞剂）抑制。此外，氯乙基可乐定是一种不可逆的α_1B阻滞剂，很容易抑制从内膜侧施用的去甲肾上腺素的作用。这表明α_<1B>受体主要分布在血管内膜侧，α_<1A>受体主要分布在血管外膜侧。因此，我们计划采用原位杂交方法研究兔主动脉中肾上腺素能α_1受体亚型mRNA的分布。根据目前已知的大鼠α_1受体亚型的碱基序列创建反义和正义寡核苷酸。从兔脑中提取mRNA，并使用oligo dT引物通过逆转录酶合成cDNA亚片段。结果，我们发现了一个336bp的cDNA亚片段，与大鼠α_<1A/D>（药理学上的α_<1D>受体）和大鼠α_<1b>（药理学上的α_<1D>受体）具有89.6%的同源性。受体）和 93.0%我们能够获得与具有同源性的 472 bp cDNA 亚片段，以及与大鼠 α_<1C>（药理学上的 α_<1A> 受体）具有 89.6% 同源性的 280 bp cDNA 亚片段。今后我们将从兔主动脉中制备mRNA，用上述^32P样品探针进行Northern blot以确认探针的特异性，然后制备兔血管冰冻切片并使用已确认特异性的cDNA制备地高辛标记探针并进行原位杂交。